Isolierung und Bildgebung von live, intakten Herzschrittmacherregionen des Nierenbeckens der Maus durch Vibratom-Schnitte

Das Nierenbecken (RP) ist eine trichterförmige, glatte Muskelstruktur, die durch regelmäßige, treibende Kontraktionen den normalen Urintransport von der Niere zum Harnleiter erleichtert. Regelmäßige RP-Kontraktionen beruhen auf der Herzschrittmacheraktivität, die aus der proximalsten Region des RP an der Becken-Nieren-Verbindung (PKJ) stammt. Aufgrund der Schwierigkeit, auf intakte Präparate des PKJ zuzugreifen und diese zu erhalten, konzentrierten sich die meisten Untersuchungen zur RP-Schrittmacherei auf Einzelzell-Elektrophysiologie und Ca²⁺ Bildgebungsexperimente. Obwohl aus solchen Arbeiten wichtige Enthüllungen über rp-Schrittmacher hervorgegangen sind, haben diese Experimente mehrere intrinsische Einschränkungen, einschließlich der Unfähigkeit, die zelluläre Identität in gemischten Suspensionen genau zu bestimmen, und des Fehlens einer In-situ-Bildgebung der RP-Schrittmacheraktivität. Diese Faktoren haben zu einem begrenzten Verständnis der Mechanismen geführt, die normalen rhythmischen RP-Kontraktionen zugrunde liegen. In diesem Artikel wird ein Protokoll beschrieben, um intakte Segmente von Maus-PKJ mit einer Vibratom-Schnitttechnik vorzubereiten. Durch die Kombination dieses Ansatzes mit Mäusen, die zellspezifische Reporter und genetisch kodierte Ca²⁺ Indikatoren exprimieren, können die Forscher möglicherweise die spezifischen Zelltypen und Mechanismen, die für peristaltische RP-Kontraktionen verantwortlich sind, die für den normalen Urintransport unerlässlich sind, genauer untersuchen.