Isolera och avbilda levande, intakt pacemakerregioner av musen njurs bäcken vid Vibratome dela upp

Njur bäckenet (RP) är en trattformad, smidig muskelstruktur som underlättar normal urintransport från njuren till urineter genom regelbundna, framstötande sammandragningar. Regelbundna RP-sammandragningar förlitar sig på pacemakeraktivitet, som härrör från den mest proximala regionen i RP vid bäcken-njurkorsningen (PKJ). På grund av svårigheten att komma åt och bevara intakta preparat av PKJ, de flesta undersökningar på RP pacemaking har fokuserat på encellig elektrofysiologi och Ca^{2 +} bildframställning experiment. Även om viktiga avslöjanden om RP-pacemaking har uppstått från sådant arbete, har dessa experiment flera inneboende begränsningar, inklusive oförmågan att exakt bestämma cellulär identitet i blandade suspensioner och bristen på in situ-avbildning av RP pacemaker-aktivitet. Dessa faktorer har resulterat i en begränsad förståelse av de mekanismer som ligger till grund för normala rytmiska RP-sammandragningar. I det här dokumentet beskrivs ett protokoll för att förbereda intakta segment av mus PKJ med hjälp av en vibratome sektionering teknik. Genom att kombinera detta tillvägagångssätt med möss som uttrycker cellspecifika reportrar och genetiskt kodade Ca^{2 +} -indikatorer, kan utredare mer exakt studera de specifika celltyper och mekanismer som ansvarar för peristaltiska RP-sammandragningar som är avgörande för normal urintransport.