Microscopie électronique à balayage par blocs série (SBF-SEM) d’échantillons de tissus biologiques

La microscopie électronique à balayage de bloc-face série (SBF-SEM) permet la collecte de centaines à des milliers d’images d’ultrastructure série-enregistrées, offrant une vue tridimensionnelle sans précédent de la microanatomie de tissu. Tandis que SBF-SEM a vu une augmentation exponentielle de l’utilisation ces dernières années, les aspects techniques tels que la préparation appropriée de tissu et les paramètres d’imagerie sont primordiaux pour le succès de cette modalité d’imagerie. Ce système d’imagerie bénéficie de la nature automatisée de l’appareil, permettant de laisser le microscope sans surveillance pendant le processus d’imagerie, avec la collecte automatisée de centaines d’images possible en une seule journée. Cependant, sans préparation tissulaire appropriée, l’ultrastructure cellulaire peut être modifiée de telle sorte que des conclusions incorrectes ou trompeuses puissent être tirées. De plus, les images sont générées en scannant la face d’îlot d’un échantillon biologique incorporé dans la résine, ce qui présente souvent des défis et des considérations qui doivent être abordés. L’accumulation d’électrons dans le bloc pendant l’imagerie, connue sous le nom de « charge tissulaire », peut entraîner une perte de contraste et une incapacité à apprécier la structure cellulaire. De plus, bien que l’augmentation de l’intensité/tension du faisceau d’électrons ou la diminution de la vitesse de balayage du faisceau puisse augmenter la résolution de l’image, cela peut également avoir l’effet secondaire malheureux d’endommager le bloc de résine et de déformer les images suivantes dans la série d’imagerie. Ici, nous présentons un protocole de routine pour la préparation d’échantillons de tissus biologiques qui préserve l’ultrastructure cellulaire et diminue la charge tissulaire. Nous fournissons également des considérations d’imagerie pour l’acquisition rapide d’images série de haute qualité avec des dommages minimaux au bloc tissulaire.