Seriell blokk-ansiktsskanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) av biologiske vevsprøver

Seriell blokk-ansikt skanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) gjør det mulig å samle hundrevis til tusenvis av serieregistrerte ultrastrukturelle bilder, og tilbyr en enestående tredimensjonal visning av vevsmikroanatomi. Mens SBF-SEM har sett en eksponentiell økning i bruk de siste årene, er tekniske aspekter som riktig vevsforberedelse og avbildningsparametere avgjørende for suksessen til denne bildemodaliteten. Dette bildesystemet drar nytte av enhetens automatiserte natur, slik at man kan forlate mikroskopet uten tilsyn under bildebehandlingsprosessen, med den automatiserte samlingen av hundrevis av bilder mulig på en enkelt dag. Men uten passende vev forberedelse cellulær ultrastruktur kan endres på en slik måte at feil eller villedende konklusjoner kan trekkes. I tillegg genereres bilder ved å skanne blokksiden av en harpiks-innebygd biologisk prøve, og dette gir ofte utfordringer og hensyn som må tas. Opphopning av elektroner i blokken under avbildning, kjent som "vevslading", kan føre til tap av kontrast og manglende evne til å sette pris på cellulær struktur. Videre, mens økende elektronstråleintensitet / spenning eller synkende stråleskanningshastighet kan øke bildeoppløsningen, kan dette også ha den uheldige bivirkningen av å skade harpiksblokken og forvrenge etterfølgende bilder i bildeserien. Her presenterer vi en rutinemessig protokoll for fremstilling av biologiske vevsprøver som bevarer cellulær ultrastruktur og reduserer vevslading. Vi tar også hensyn til bildebehandling for rask anskaffelse av seriebilder av høy kvalitet med minimal skade på vevsblokken.