Seriell block-face scanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) av biologiska vävnadsprover

Seriell block-face scanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) möjliggör insamling av hundratals till tusentals serieregistrerade strukturella bilder, vilket ger en oöverträffad tredimensionell vy av vävnad mikroanatomi. Medan SBF-SEM har sett en exponentiell ökning av användningen under de senaste åren, tekniska aspekter såsom korrekt vävnad beredning och bildframställning parametrar är av största vikt för framgången med denna bildframställning modalitet. Detta bildsystem drar nytta av enhetens automatiserade karaktär, vilket gör att man kan lämna mikroskopet obevakat under bildprocessen, med den automatiska samlingen av hundratals bilder möjliga på en enda dag. Men utan lämplig vävnad förberedelse cellulära ultrastruktur kan ändras på ett sådant sätt att felaktiga eller vilseledande slutsatser kan dras. Dessutom genereras bilder genom att skanna block-ansiktet på ett hartsinbäddat biologiskt prov och detta innebär ofta utmaningar och överväganden som måste åtgärdas. Ackumulering av elektroner inom blocket under avbildning, känd som "vävnadsladdning", kan leda till en förlust av kontrast och en oförmåga att uppskatta cellulär struktur. Dessutom, medan ökande elektronstråleintensitet / spänning eller minskande strålskanningshastighet kan öka bildupplösningen, kan detta också ha den olyckliga bieffekten att skada hartsblocket och förvränga efterföljande bilder i bildserien. Här presenterar vi ett rutinprotokoll för beredning av biologiska vävnadsprover som bevarar cellulär ultrastruktur och minskar vävnadsladdningen. Vi tillhandahåller också bildframställning överväganden för snabb förvärv av högkvalitativa seriella bilder med minimal skada på vävnad block.