تلطيخ التألق المناعي بالكامل ، والتصوير البؤري وإعادة البناء 3D للعقدة الجيبية الأذينية والأذينية البطينية في الماوس

يتم إجراء الإشارة الكهربائية التي تولدها خلايا جهاز تنظيم ضربات القلب في العقدة الجيبية الأذينية (SAN) من خلال نظام التوصيل ، والذي يتضمن العقدة الأذينية البطينية (AVN) ، للسماح بإثارة وتقلص القلب كله. أي خلل في SAN أو AVN يؤدي إلى عدم انتظام ضربات القلب ، مما يشير إلى دورهم الأساسي في الفيزيولوجيا الكهربية وعدم انتظام ضربات القلب. تستخدم نماذج الفئران على نطاق واسع في أبحاث عدم انتظام ضربات القلب ، لكن التحقيق المحدد في SAN و AVN لا يزال يمثل تحديا.

يقع SAN عند تقاطع محطة crista مع الوريد الأجوف العلوي ويقع AVN في قمة مثلث كوخ ، الذي يتكون من فتحة الجيب التاجي ، والحلقة ثلاثية الشرف ، ووتر تودارو. ومع ذلك ، نظرا لصغر حجمها ، لا يزال التصور بواسطة الأنسجة التقليدية يمثل تحديا ولا يسمح بدراسة SAN و AVN داخل بيئة 3D الخاصة بهم.

هنا نصف نهج التألق المناعي الكامل الذي يسمح بالتصور المحلي للماوس المسمى SAN و AVN. تم تصميم تلطيخ التألق المناعي بالكامل للأقسام الأصغر من الأنسجة دون الحاجة إلى التقسيم اليدوي. لهذا الغرض ، يتم تشريح قلب الفأر ، مع إزالة الأنسجة غير المرغوب فيها ، تليها التثبيت والنفاذية والحجب. ثم يتم تلطيخ خلايا نظام التوصيل داخل SAN و AVN بجسم مضاد ل HCN4. يسمح الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر ومعالجة الصور بالتمايز بين الخلايا العقدية وخلايا عضلة القلب العاملة ، وتحديد موقع SAN و AVN بوضوح. علاوة على ذلك ، يمكن دمج أجسام مضادة إضافية لتسمية أنواع الخلايا الأخرى أيضا ، مثل الألياف العصبية.

بالمقارنة مع الأنسجة المناعية التقليدية ، يحافظ تلطيخ التألق المناعي الكامل على السلامة التشريحية لنظام التوصيل القلبي ، مما يسمح بالتحقيق في التنخر اللاوعائي. خاصة في تشريحها وتفاعلاتها مع عضلة القلب العاملة المحيطة والخلايا غير العضلية.