Étude de la calcification de la valve aortique par isolement et culture de lymphocytes T à l’aide de cellules nourricières de Buffy Coat irradié

La maladie valvulaire aortique calcifiante (MCDA), un processus pathologique actif allant d’un léger épaississement de la valve à une calcification sévère, est associée à une mortalité élevée, malgré de nouvelles options thérapeutiques telles que le remplacement valvulaire aortique transcathéter (RVAC).

Les voies complètes qui commencent par la calcification valvulaire et conduisent à une sténose aortique sévère ne restent que partiellement comprises. En fournissant une représentation proche des cellules valvulaires aortiques in vivo, le dosage des lymphocytes T à partir du tissu valvulaire sténotique pourrait être un moyen efficace de clarifier leur rôle dans le développement de la calcification. Après l’excision chirurgicale, l’échantillon de valve aortique fraîche est disséqué en petits morceaux et les lymphocytes T sont cultivés, clonés puis analysés à l’aide du tri cellulaire activé par fluorescence (FACS).

La procédure de coloration est simple et les tubes colorés peuvent également être fixés à l’aide de 0,5% de paraformaldéhyde et analysés jusqu’à 15 jours plus tard. Les résultats générés par le panneau de coloration peuvent être utilisés pour suivre les changements dans les concentrations de lymphocytes T au fil du temps par rapport à l’intervention et pourraient facilement être développés pour évaluer les états d’activation de sous-types de lymphocytes T spécifiques d’intérêt. Dans cette étude, nous montrons l’isolement des lymphocytes T, effectué sur des échantillons frais de valve aortique calcifiée et les étapes d’analyse des clones de lymphocytes T à l’aide de la cytométrie en flux pour mieux comprendre le rôle de l’immunité adaptative dans la physiopathologie de la MCDA.