大量庞廷出血通过双注射自体血

Summary

我们提出了一个协议，通过双注射自体血液，在老鼠中建立一个巨大的庞然大河出血模型。

Abstract

我们提供一个协议，在老鼠中建立一个巨大的庞然大河出血模型。这项研究使用了重约250克的老鼠。一百微升的自体血从尾静脉中取出，立体有毒地注射到庞斯中。注射过程分为两个步骤：首先，将10μL的血液注射到特定位置，前柱位置（AP）-9.0毫米：横向（拉特） 0 毫米：垂直（垂直）-9.2毫米，然后第二次注射位于AP-9.0毫米的残余血液;拉特 0 毫米;垂直 -9.0 毫米，间隔 20 分钟。平衡束测试、肢体放置测试和修改后的 Voestch 神经分数用于评估神经功能。磁共振成像 （MRI） 用于评估体内出血量。这种模型的症状与大量庞汀出血患者一致。

Introduction

脑内出血占中风患者的五分之一。脑内出血的预后取决于出血的速度、体积和位置^。与前脑出血相比，脑干出血具有较高的死亡率和发病率^3。大约40%的脑部出血发生在第4个庞氏^菌中。庞汀出血的病因学和病理生理学与前脑出血⁵大出血有很大不同，研究较少。

有两种庞丁出血动物模型。一种是自发出血模型，由注入细菌拼贴酶在庞^6，7，8诱发。这种模式的最大优点是出血是自发的。然而，拼贴酶只能诱发少量的庞丁出血。此外，拼贴酶可能会导致大脑的其他伤害。另一种模型是由自体血液的立体定向注射^引起的。这种模式的优点是，它很容易掌握与高成功率。从理论上讲，研究人员可以将任何血量注入庞然大雅的任何位置。但是，由于通过针线的回漏，注射量有限。最近，双注法已推广，以减少回漏^9。这种方法注射两次自体血，注射间隔为20分钟。双注射法用于诱发轻度 （30 μL） 和中度 （60 μL） 庞....

Protocol

该议定书经广州医科大学第二附属医院动物护理与使用委员会审查批准。老鼠是由南方医科大学动物中心提供的。实验设计见图1。

1. 动物和仪器

1. 使用8周大的雄性斯普拉格-道利大鼠，体重250±10克。
2. 在环境温度为 25 °C、相对湿度为 65% 和 12/12h 的光暗循环下，在受控环境条件下将大鼠安置至少 7 天。
3. 无限制地提供食物和水。
<.......

Discussion

在本研究中，我们提供了一个协议，以产生一个巨大的庞然大海大鼠模型。该模型可用于研究大庞丁出血的病理生理机理和预后。

在整个实验中，使用了25只老鼠，其中只有一只死亡。对MRI、毛解剖和 HE 染色的验证表明，该方法的死亡率非常低，成功率很高。要建立大规模的庞然大物出血模型，必须解决两个问题，注射的自体血液往往泄漏到亚拉氏体空间，并沿着针道流回?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100ml Saline solution	Guangdong yixiang	191222201 C1	Preparing heparin diluent
100μl Microinjector	Shanghai Gaoge		Injection of autologous blood
1ml Syringe	Jiangsu Zhiyu	20191014	Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol	Shandong Lierkang		Disinfection of rat tail
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Animal anesthesia system	RWD	R510-31S-6	Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Blades	Shanghai Feiying	74-C	For gross anatomy
Bone cement	Shanghai Xinshiji	20180306	Surgicl instruments
Brain tank	Shenzhen LEIYEA		For gross anatomy
Butorphanol tartrate	Jiangsu Hengrui		For pain management
Electric cranial drill	Nanjing  Darwin biotechnology	20180090018	Making a burr hole on the skull
EP tube	Nantong Surui		Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream	Yunnan pharmacy		Eyes protection
HE dye liquor	Solarbio	G1120	For HE staining
Heating pad	Dangerous Jungle	JR01	Keeping warm
Heparin sodium injection	Chengdu Haitong Pharmacal Company	190701	Preparing heparin diluent
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	20080701	Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Micro-injection pump	Baoding Leifu	TFD03-01-C	Injection of autologous blood
MRI system	Philips		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong	J32020	Surgicl instruments
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Q-tips	Jiangxi Songhe		Surgicl instruments
Scalp heedle	Jiangxi Hongda	20200313	Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel	Shanghai Kaiyuan	170902	Surgicl instruments
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong	Y00040	Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus	RWD	900-00001-00	for surgical positioning
Surgical towel	Xinxiang Huakangweicai	20070601	Surgicl instruments
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Suture scissors	Shanghai Jinzhong	J25041	Surgicl instruments
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong	J31080	Surgicl instruments