Canlı Memeli İşitsel Saç Hücrelerinde Nano ölçekli Çözünürlüğe Sahip Stereosilia Bundle Görüntüleme

İç kulak kılı hücreleri ses kaynaklı yer değiştirmeleri algılar ve bu uyaranları artan yükseklik sıralarına göre düzenlenmiş stereosiliden oluşan bir saç demetinde elektrik sinyallerine aktarır. Stereosilia saptırıldığında, mekanosensitive transdüksiyon kanallarına kuvvet aktaran stereosilia birbirine bağlı küçük (~5 nm çapında) hücre dışı uç bağlantılarını çekerler. Mechanotransdüksiyon on yıllardır canlı saç hücrelerinde çalışılsa da, stereosilisin uçlarındaki mekanotransdüksiyon makinelerinin işlevsel olarak önemli ultrayapısal detayları (uç bağlantı dinamikleri veya transdüksiyona bağımlı stereosilia remodeling gibi) hala sadece elektron mikroskopisi olan ölü hücrelerde çalışılabilir. Teorik olarak, atomik kuvvet mikroskopisi gibi tarama prob teknikleri stereosilia yüzeyini görselleştirmek için yeterli çözünürlüğe sahiptir. Bununla birlikte, görüntüleme modundan bağımsız olarak, atomik kuvvet mikroskopi probunun stereosilia demetiyle en ufak teması bile genellikle demete zarar verir. Burada canlı kemirgen işitsel saç hücrelerinin zıplayan prob iyon iletim mikroskopisi (HPICM) görüntülemesi için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu temassız tarama prob tekniği, saç hücreleri gibi karmaşık bir topografya ile canlı hücrelerin yüzeyinin tek nanometre çözünürlüğüyle ve numuneyle fiziksel temas kurmadan zaman atlamalı görüntülenmesini sağlar. HPICM, pipete yakın çevredeki hücre yüzeyini tespit etmek için cam nanopipetten geçen bir elektrik akımı kullanırken, 3D konumlandırmalı piezoelektrik sistem yüzeyi tarar ve görüntüsünü oluşturur. HPICM ile stereosilia demetlerini ve stereosiliyi canlı işitsel saç hücrelerinde birbirine bağlayan bağlantıları farkedilir bir hasar olmadan birkaç saat boyunca görüntüleyebildik. HPICM kullanımının, işlevlerinin daha iyi anlaşılması için canlı saç hücrelerinin stereosilisinde ultrayapısal değişikliklerin doğrudan araştırılmasına izin vereceğini öngörüyoruz.