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Biochemistry

优化了炔基脂肪酸类似物的掺入,用于使用点击化学检测脂肪酰化蛋白

Published: April 9th, 2021

DOI:

10.3791/62107

1Department of Biology, University of Waterloo

Abstract

脂肪酰化是饱和脂肪酸向蛋白质底物的共价添加,除了在癌症和神经退行性疾病中具有重要意义外,还具有调节无数细胞功能的重要性。脂肪酰化检测方法的最新发展使得脂肪酰化蛋白的高效和非危险检测成为可能,特别是通过使用具有生物正交标记的点击化学。然而,点击化学检测可能会受到在细胞培养中添加长链脂肪酸的溶解度差和潜在毒性作用的限制。这里描述的是一种标记方法,使用皂化脂肪酸与不含脂肪酸的BSA以及脱脂介质进行优化递送,可以改善难以检测的脂肪酰化蛋白的检测。这种效应在炔基 - 硬脂酸酯类似物17-ODYA中最为明显,17-ODYA一直是酰化蛋白点击化学检测中最常用的脂肪酸类似物。这种修饰将改善细胞掺入并提高对酰化蛋白检测的敏感性。此外,这种方法可以应用于各种细胞类型,并与其他测定相结合,例如脉冲追逐分析,细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记,以及用于脂肪酰化蛋白定量分析的质谱分析。

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