Geoptimaliseerde integratie van alkynylvetzuuranalogen voor de detectie van vetacyleiwitten met behulp van Click Chemistry

Vetaylering, de covalente toevoeging van verzadigde vetzuren aan eiwitsubstraten, is belangrijk bij het reguleren van een groot aantal cellulaire functies, naast de implicaties ervan bij kanker en neurodegeneratieve ziekten. Recente ontwikkelingen in vetacylatiedetectiemethoden hebben een efficiënte en niet-gevaarlijke detectie van vet-acyleerde eiwitten mogelijk gemaakt, met name door het gebruik van klikchemie met bio-orthogonale etikettering. De detectie van klikchemie kan echter worden beperkt door de slechte oplosbaarheid en mogelijke toxische effecten van het toevoegen van lange keten vetzuren aan celkweek. Hier wordt een etiketteringsbenadering beschreven met geoptimaliseerde toediening met behulp van verzeepte vetzuren in combinatie met vetzuurvrij BSA, evenals gedelipide media, die de detectie van moeilijk te detecteren vet-acyleerde eiwitten kunnen verbeteren. Dit effect was het meest uitgesproken met het alkynyl-stearaatanaloog, 17-ODYA, dat het meest gebruikte vetzuuranaloog is geweest bij de detectie van geacyleerde eiwitten. Deze modificatie zal de cellulaire opname verbeteren en de gevoeligheid voor acylated protein detection verhogen. Bovendien kan deze benadering worden toegepast in verschillende celtypen en worden gecombineerd met andere assays zoals puls-chase-analyse, stabiele isotoopetikettering met aminozuren in celkweek en massaspectrometrie voor kwantitatieve profilering van vet-geacyleerde eiwitten.