Incorporation optimisée d’analogues d’acides gras alcynyles pour la détection de protéines acylées grasses à l’aide de la chimie du clic

L’acylation graisseuse, l’ajout covalent d’acides gras saturés aux substrats protéiques, est importante dans la régulation d’une myriade de fonctions cellulaires en plus de ses implications dans le cancer et les maladies neurodégénératives. Les développements récents dans les méthodes de détection de l’acylation grasse ont permis une détection efficace et non dangereuse des protéines acylées grasses, en particulier grâce à l’utilisation de la chimie du clic avec marquage bio-orthogonal. Cependant, la détection de la chimie du clic peut être limitée par la faible solubilité et les effets toxiques potentiels de l’ajout d’acides gras à longue chaîne à la culture cellulaire. Décrit ici est une approche d’étiquetage avec une livraison optimisée en utilisant des acides gras saponifiés en combinaison avec de la BSA sans acide gras, ainsi que des milieux délipidés, ce qui peut améliorer la détection des protéines acylées grasses difficiles à détecter. Cet effet a été le plus prononcé avec l’analogue alcynyl-stéarate, 17-ODYA, qui a été l’analogue d’acide gras le plus couramment utilisé dans la détection chimique du clic des protéines acylées. Cette modification améliorera l’incorporation cellulaire et augmentera la sensibilité à la détection des protéines acylées. En outre, cette approche peut être appliquée à une variété de types de cellules et combinée à d’autres tests tels que l’analyse de chasse au pouls, le marquage d’isotopes stables avec des acides aminés en culture cellulaire et la spectrométrie de masse pour le profilage quantitatif des protéines acylées grasses.