Abstract
Biochemistry
L'acilazione grassa, l'aggiunta covalente di acidi grassi saturi ai substrati proteici, è importante nella regolazione di una miriade di funzioni cellulari oltre alle sue implicazioni nel cancro e nelle malattie neurodegenerative. I recenti sviluppi nei metodi di rilevamento dell'acilazione grassa hanno consentito il rilevamento efficiente e non pericoloso delle proteine acilate grasse, in particolare attraverso l'uso della chimica del clic con etichettatura bio-ortogonale. Tuttavia, il rilevamento della chimica dei clic può essere limitato dalla scarsa solubilità e dai potenziali effetti tossici dell'aggiunta di acidi grassi a catena lunga alla coltura cellulare. Qui è descritto un approccio di etichettatura con consegna ottimizzata utilizzando acidi grassi saponificati in combinazione con BSA privo di acidi grassi, nonché mezzi delipidati, che possono migliorare il rilevamento di proteine acilate grasse difficili da rilevare. Questo effetto è stato più pronunciato con l'analogo alchil-stearato, 17-ODYA, che è stato l'analogo degli acidi grassi più comunemente usato nel rilevamento della chimica del clic delle proteine acilate. Questa modifica migliorerà l'incorporazione cellulare e aumenterà la sensibilità al rilevamento di proteine acilate. Inoltre, questo approccio può essere applicato in una varietà di tipi di cellule e combinato con altri saggi come l'analisi pulse-chase, l'etichettatura isotopica stabile con aminoacidi in coltura cellulare e la spettrometria di massa per la profilazione quantitativa delle proteine acilate grasse.
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