クリックケミストリーを用いた脂肪酸アシル化タンパク質の検出のためのアルキニル脂肪酸類似体の最適化された組み込み

脂肪アシル化は、タンパク質基質への飽和脂肪酸の共有結合的付加であり、癌および神経変性疾患におけるその含意に加えて、無数の細胞機能を調節する上で重要である。脂肪アシル化検出法における最近の開発により、特に生体直交標識によるクリックケミストリーの使用により、脂肪アシル化タンパク質の効率的で非危険な検出が可能になりました。しかし、クリックケミストリー検出は、細胞培養物に長鎖脂肪酸を添加することによる溶解性の悪さと潜在的な毒性作用によって制限される可能性があります。ここで説明するのは、ケン化脂肪酸を脂肪酸フリーBSAと組み合わせて使用する送達を最適化した標識アプローチ、および脱脂培地であり、検出が困難な脂肪酸アシル化タンパク質の検出を改善することができます。この効果は、アシル化タンパク質のクリックケミストリー検出において最も一般的に使用されている脂肪酸類似体であるアルキニル - ステアリン酸類似体、17-ODYAで最も顕著であった。この修飾は、細胞取り込みを改善し、アシル化タンパク質検出に対する感度を高める。さらに、このアプローチは、さまざまな細胞タイプに適用し、パルスチェイス分析、細胞培養中のアミノ酸による安定同位体標識、脂肪アシル化タンパク質の定量プロファイリングのための質量分析などの他のアッセイと組み合わせることができます。