Optimalisert inkorporering av Alkynyl fettsyreanaloger for påvisning av fettakylerte proteiner ved hjelp av klikkkjemi

Fettakylering, den kovalente tilsetningen av mettede fettsyrer til proteinsubstrater, er viktig for å regulere et utall cellulære funksjoner i tillegg til dets implikasjoner i kreft og nevrodegenerative sykdommer. Nylige utviklinger i fettakyleringsdeteksjonsmetoder har gjort det mulig med effektiv og ikke-farlig deteksjon av fettakylerte proteiner, spesielt ved bruk av klikkkjemi med bio-ortogonal merking. Imidlertid kan klikkkjemideteksjon begrenses av dårlig løselighet og potensielle toksiske effekter av å legge til lange kjedefettsyrer til cellekulturen. Beskrevet her er en merking tilnærming med optimalisert levering ved hjelp av saponified fettsyrer i kombinasjon med fettsyrefrie BSA, samt delipidated media, som kan forbedre påvisning av vanskelig å oppdage fett acylated proteiner. Denne effekten ble mest uttalt med alkynyl-stearate analog, 17-ODYA, som har vært den mest brukte fettsyreanalogen i klikkkjemideteksjon av acylaterte proteiner. Denne modifikasjonen vil forbedre cellulær inkorporering og øke følsomheten for acylert proteindeteksjon. I tillegg kan denne tilnærmingen brukes i en rekke celletyper og kombineres med andre analyser som pulsjaktanalyse, stabil isotopmerking med aminosyrer i cellekultur og massespektrometri for kvantitativ profilering av fettakylerte proteiner.