Incorporação otimizada de Análogos de Ácido Graxo Alkynyl para a detecção de proteínas aciclantes gordurosas usando a Química do Clique

A aciilação gordurosa, a adição covalente de ácidos graxos saturados a substratos proteicos, é importante na regulação de uma miríade de funções celulares, além de suas implicações em câncer e doenças neurodegenerativas. Desenvolvimentos recentes em métodos de detecção de aciilação gordurosa permitiram a detecção eficiente e não perigosa de proteínas aciclantes gordurosas, particularmente através do uso de química de cliques com rotulagem bio-ortogonal. No entanto, a detecção de química de cliques pode ser limitada pela solubilidade ruim e potenciais efeitos tóxicos de adicionar ácidos graxos de cadeia longa à cultura celular. Descrita aqui é uma abordagem de rotulagem com entrega otimizada usando ácidos graxos saponificados em combinação com BSA livre de ácidos graxos, bem como mídia delipidada, que pode melhorar a detecção de proteínas aciclantes difíceis de detectar. Este efeito foi mais pronunciado com o analógico alquilo-estearate, 17-ODYA, que tem sido o analógico de ácido graxo mais usado na detecção de química de cliques de proteínas acicladas. Essa modificação melhorará a incorporação celular e aumentará a sensibilidade à detecção de proteínas acicladas. Além disso, essa abordagem pode ser aplicada em uma variedade de tipos celulares e combinada com outros ensaios como análise de perseguição de pulso, rotulagem estável de isótopos com aminoácidos na cultura celular e espectrometria de massa para perfilação quantitativa de proteínas aciclatadas gordurosas.