Incorporación optimizada de análogos de ácidos grasos alquilinos para la detección de proteínas aciladas grasas utilizando Click Chemistry

La acilación grasa, la adición covalente de ácidos grasos saturados a sustratos de proteínas, es importante para regular una miríada de funciones celulares, además de sus implicaciones en el cáncer y las enfermedades neurodegenerativas. Los desarrollos recientes en los métodos de detección de acilación grasa han permitido la detección eficiente y no peligrosa de proteínas aciladas grasas, particularmente mediante el uso de la química de clics con etiquetado bio-ortogonal. Sin embargo, la detección de química de clic puede estar limitada por la escasa solubilidad y los posibles efectos tóxicos de agregar ácidos grasos de cadena larga al cultivo celular. Aquí se describe un enfoque de etiquetado con entrega optimizada utilizando ácidos grasos saponificados en combinación con BSA libre de ácidos grasos, así como medios delipidados, que pueden mejorar la detección de proteínas aciladas grasas difíciles de detectar. Este efecto fue más pronunciado con el análogo alquil-estearato, 17-ODYA, que ha sido el análogo de ácidos grasos más utilizado en la detección química de clics de proteínas aciladas. Esta modificación mejorará la incorporación celular y aumentará la sensibilidad a la detección de proteínas aciladas. Además, este enfoque se puede aplicar en una variedad de tipos de células y combinarse con otros ensayos como el análisis de persecución de pulsos, el etiquetado de isótopos estables con aminoácidos en cultivo celular y la espectrometría de masas para el perfil cuantitativo de proteínas aciladas grasas.