Optimerad inkorporering av alkynylfettsyraanaloger för detektion av fettacylaterade proteiner med hjälp av klickkemi

Fettacylation, den kovalenta tillsatsen av mättade fettsyror till proteinsubstrat, är viktig för att reglera en myriad av cellulära funktioner utöver dess konsekvenser vid cancer och neurodegenerativa sjukdomar. Den senaste utvecklingen inom fettacylationsdetekteringsmetoder har möjliggjort effektiv och icke-farlig detektion av fettacylerade proteiner, särskilt genom användning av klickkemi med bioortogonal märkning. Klickkemidetektering kan dock begränsas av den dåliga lösligheten och potentiella toxiska effekterna av att tillsätta långkedjiga fettsyror till cellkulturen. Här beskrivs en märkningsmetod med optimerad leverans med förtvålade fettsyror i kombination med fettsyrafri BSA, samt delipiderade medier, vilket kan förbättra detekteringen av svårupptäckta fettacylerade proteiner. Denna effekt var mest uttalad med alkynyl-stearatanalogen, 17-ODYA, som har varit den vanligaste fettsyraanalogen vid klickkemidetektering av acylerade proteiner. Denna modifiering kommer att förbättra cellulär inkorporering och öka känsligheten för acyleerad proteindetektering. Dessutom kan detta tillvägagångssätt tillämpas i en mängd olika celltyper och kombineras med andra analyser såsom pulsjaktanalys, stabil isotopmärkning med aminosyror i cellodling och masspektrometri för kvantitativ profilering av fettacylaterade proteiner.