Single-Molecule Dwell-Time Analysis of restriction Endonuclease-mediated DNA cleavage(제한 엔도뉴클레아제 매개 DNA 절단의 단일 분자 체류 시간 분석)

이 새로운 전반사 형광 현미경 기반 분석법은 한 번의 실험에서 수백 개의 개별 제한 엔도뉴클레아제(REase) 분자에 대한 촉매 주기의 길이를 동시에 측정할 수 있도록 합니다. 이 분석은 단백질 라벨링이 필요하지 않으며 단일 이미징 채널로 수행할 수 있습니다. 또한 여러 개별 실험의 결과를 취합하여 잘 채워진 체류 시간 분포를 생성할 수 있습니다. 결과 체류 시간 분포를 분석하면 직접 관찰할 수 없는 운동 단계의 존재를 밝혀 DNA 절단 메커니즘을 설명하는 데 도움이 될 수 있습니다. 잘 연구된 REase, EcoRV(회문 서열 GAT↓ATC(여기서 ↓는 절단 부위)를 절단하는 이합체 유형 IIP 제한 엔도뉴클레아제와 함께 이 분석을 사용하여 수집된 예제 데이터는 이전 연구와 일치합니다. 이러한 결과는 EcoRV가 DNA가 없을 때 마그네슘이 결합한 후 마그네슘을 도입하여 시작되는 DNA 절단 경로에 최소 3단계가 있음을 시사하며, 각 단계에 대해 평균 0.17 ^s-1 의 비율이 있습니다.