Широкоугольная визуализация в реальном времени локальных и системных сигналов раны при арабидопсисе

Растения реагируют на механические напряжения, такие как раны и травоядные, вызывая защитные реакции как в поврежденных, так и в дистальных неповрежденными частях. При ранении листа на месте раны происходит повышение концентрации цитозольного иона кальция (сигнал Ca^2+). Этот сигнал быстро передается в неповрежденные листья, где активируются защитные реакции. Наше недавнее исследование показало, что глутамат, просачивающийся из раненых клеток листа в апопласт вокруг них, служит сигналом раны. Этот глутамат активирует глутамат-рецептороподобные каналы Ca^2+, что затем приводит к распространению сигнала Ca²⁺ на большие расстояния по всему растению. Пространственные и временные характеристики этих событий могут быть получены с помощью визуализации в реальном времени живых растений, экспрессирующих генетически закодированные флуоресцентные биосенсоры. Здесь мы представляем общезаводской метод визуализации в режиме реального времени для мониторинга динамики как сигналов Ca^2+, так и изменений в апопластическом глутамате, которые происходят в ответ на ранение. Этот подход использует широкоугольный флуоресцентный микроскоп и трансгенные растения Arabidopsis, экспрессирующие биосенсоры Ca²⁺ и глутамата на основе зеленого флуоресцентного белка (GFP). Кроме того, мы представляем методологию, которая легко вызывает раневое, вызванное глутаматом быстрое и дальнее распространение сигнала Ca^2+. Этот протокол также может быть применен к исследованиям других стрессов растений, чтобы помочь выяснить, как системная сигнализация растений может быть вовлечена в их сигнальные и ответные сети.