Helmonterad färgning, visualisering och analys av fungiforma, cirkumvallat och smaklökar med gom

Smaklökar är samlingar av smaktransdukterande celler specialiserade för att upptäcka undergrupper av kemiska stimuli i munhålan. Dessa transdukterande celler kommunicerar med nervfibrer som bär denna information till hjärnan. Eftersom smaktransdukterande celler kontinuerligt dör och ersätts under hela vuxenlivet, är smakknoppsmiljön både komplex och dynamisk, vilket kräver detaljerade analyser av dess celltyper, deras platser och eventuella fysiska relationer mellan dem. Detaljerade analyser har begränsats av tungvävnad heterogenitet och densitet som har avsevärt minskat antikroppspermeabilitet. Dessa hinder kräver sektioneringsprotokoll som resulterar i att smaklökar delas mellan sektioner så att mätningarna bara approximeras och cellrelationer går förlorade. För att övervinna dessa utmaningar innebär de metoder som beskrivs häri att samla in, imaging och analysera hela smaklökar och enskilda terminal arbors från tre smakregioner: fungiform papillae, cirkumvallat papiller och gommen. Att samla hela smaklökar minskar partiskhet och teknisk variabilitet och kan användas för att rapportera absoluta tal för funktioner inklusive smak-knopp volym, total smak-knopp innervation, transdukterande cellantal och morfologin hos enskilda terminal arbors. För att demonstrera fördelarna med denna metod ger detta papper jämförelser av smaklök och innervationsvolymer mellan fungiforma och omkretsa smaklökar med en allmän smakknoppmarkör och en etikett för alla smakfibrer. Ett arbetsflöde för användning av glescellig genetisk märkning av smakneuroner (med märkta delmängder av smaktransdukterande celler) tillhandahålls också. Detta arbetsflöde analyserar strukturerna hos enskilda smaknerv arbors, celltypsnummer och de fysiska relationerna mellan celler med hjälp av bildanalysprogramvara. Tillsammans ger dessa arbetsflöden ett nytt tillvägagångssätt för vävnadsberedning och analys av både hela smaklökar och den fullständiga morfologin hos deras innervating arbors.