Agradecemos aos cirurgiões e patologistas dos Hospitais Universitários de Leicester NHS Trust por fornecer tecido tumoral ressecado cirúrgico. Agradecemos também à instalação de Histologia dentro dos Serviços de Biotecnologia Core por ajudar no processamento e secção de tecidos FFPE e Kees Straatman pelo apoio com o uso do Vectra Polaris. Esta pesquisa foi apoiada e financiada pelo Consórcio Explant composto por quatro parceiros: A Universidade de Leicester, a Unidade de Toxicologia da MRC, o Cancer Research UK Therapeutic Discovery Laboratories e o LifeArc. Apoio adicional foi fornecido pelo CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151). O financiamento para GM, CD e NA foi fornecido pelo Programa Catalisador do Câncer de Mama Now (2017NOVPCC1066), que é apoiado por financiamento da Pfizer.

1. Coleta de tecidos
<ol><li>Após a cirurgia, transfira amostras de tumor humanos recentemente resseccionadas em um tubo contendo 25 mL de meio de cultura fresca (o meio águia modificado de Dulbecco suplementado com 4,5 g/L de glicose e L-glutamina + 1% (v/v) soro fetal do bezerro + 1% penicilina-estreptomicina) e armazenado no gelo. Processe a explanta dentro de 2h de cirurgia em um capô estéril classe II.</li>
</ol>2. Preparaçãode xplant</...

Este artigo descreve os métodos de geração, tratamento medicamentoso e análise de PDEs e destaca as vantagens da plataforma como um sistema de modelo pré-clínico. A ex-cultura de um tumor recém-ressecado, que não envolve sua desconstrução, permite a retenção da arquitetura tumoral13,24 e, portanto, as interações espaciais dos componentes celulares no TME, bem como a heterogeneidade intratumoral. Este método demonstra como, utilizando um marcador es...

O desenvolvimento de agentes anticancerígenos eficazes e seguros requer modelos pré-clínicos adequados que também possam fornecer insights sobre mecanismos de ação que possam facilitar a identificação de biomarcadores preditivos e farmacodinâmicos. Heterogeneidade inter e intratumor1,2,3,4,5 e o TME6,7,8,9,10,11,12 são conhecidos por influenciar respostas anticancerígenas, e muitos modelos de câncer pré-clínico existentes, como linhas celulares, organoides e modelos de camundongos não são capazes de acomodar totalmente esses modelos cruciais de medicamentos Características. Um modelo "ideal" é aquele que pode recapitular as complexas interações espaciais de malignos com células não malignas dentro dos tumores, bem como refletir as diferenças regionais dentro dos tumores. Este artigo se concentra nos PDEs como uma plataforma emergente que pode cumprir muitos desses requisitos13.
O primeiro exemplo do uso de PDEs humanos, também conhecidos como histoculturas, remonta ao final da década de 1980, quando Hoffman et al. geraram fatias de tumores humanos recém-ressecados e os cultivaram em uma matriz de colágeno14,15. Isso envolveu o estabelecimento de um sistema de cultura 3D que preservasse a arquitetura tecidual, garantindo a manutenção de componentes estrômicos e interações celulares dentro do TME. Sem desconstruir o tumor original, Hoffman et al.16 anunciaram uma nova abordagem da pesquisa translacional, e desde então, muitos grupos otimizaram diferentes métodos de explantamento com o objetivo de preservar a integridade do tecido e gerar dados precisos de resposta a medicamentos17,18,19,20,21,22,23,24 , embora algumas diferenças entre os protocolos sejam evidentes. Butler et al. cultivaram explanações em esponjas de gelatina para ajudar a difusão de nutrientes e medicamentos através do espécime20,21,25, enquanto Majumder et al. criaram um ecossistema tumoral ao cultivar explants em cima de uma matriz composta de tumor e proteínas estrômicas na presença de soro autólogo derivado do mesmo paciente22, 23.
Mais recentemente, nosso grupo criou um protocolo pelo qual as explanações são geradas pela fragmentação de tumores em peças do tamanho de 2 - 3 mm3que são então colocadas sem componentes adicionais em membranas permeáveis na interface ar-líquido de um sistema de cultura24. Juntos, esses inúmeros estudos demonstraram que os PDEs permitem a cultura de fragmentos vivos intactos de tumores humanos que retêm a arquitetura espacial e a heterogeneidade regional dos tumores originais. Em experimentos originais, explanações ou histoculturas eram geralmente submetidas à homogeneização após o tratamento medicamentoso, após os quais vários ensaios de viabilidade foram aplicados às amostras homogeneizadas, tais como o ensaio de resposta a medicamentos de histocultura20,21, o ensaio MTT (3-(6)-2,5-difeniltetrazolium), o ensaio lactato desidrogenase, ou o ensaio baseado em resazurina26,27,28 . Os recentes avanços nas técnicas de análise de endpoint, particularmente a patologia digital, agora ampliaram o repertório de testes de ponto final e ensaios que podem ser realizados em explants29,30. Para aplicar essas novas tecnologias, em vez de homogeneização, as explicações são fixadas em formalina, incorporadas na parafina (FFPE) e depois analisadas utilizando técnicas de imunossuagem, permitindo o perfil espacial. Exemplos dessa abordagem foram documentados para câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de mama, o câncer colorretal, e as explanações de mesotelioma pelas quais a coloração imunohistoquímica para o marcador de proliferação, Ki67, e o marcador apoptótico, poli-ADP de poli-ADP (cPARP), foi usada para monitorar alterações na proliferação celular e morte celular24,31,32,33,34.
A imunofluorescência multiplexada é particularmente favorável ao perfil espacial das respostas de medicamentos em explantes no pontofinal 35. Por exemplo, é possível medir a relocalização e a distribuição espacial de classes específicas de células imunes, como macrófagos ou células T, dentro do TME após o tratamento medicamentoso13,36,37,38, e investigar se um agente terapêutico pode favorecer a transição de "tumor frio" para "tumor quente"39 . Nos últimos anos, esse grupo se concentrou na derivação de PDEs de diferentes tipos de tumores (NSCLC, câncer de mama, câncer colorretal, melanoma) e no teste de uma série de agentes anticancerígenos, incluindo quimioterapias, inibidores de pequenas moléculas e inibidores de checkpoint imunológico (ICIs). Os métodos de análise de ponto final foram otimizados para incluir imunofluorescência multiplexada para permitir o perfil espacial de biomarcadores para viabilidade, bem como biomarcadores para diferentes constituintes do TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody Diluent / Block, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Antibody diluent/blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead NANOpure Diamond</td>
			<td>Barnstead</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Pure (UP) H2O machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7129</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Multiple Well Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3516</td>
			<td>6 multiwell plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Dilactate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 17 mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>100 mm diameter dish for tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1x) Dubelcco&#39;s Modified Eagle Medium + 4.5 g/L D-Glucose + 110 mg/mL Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco (Life Technologies)</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>Tissue culture medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>VWR</td>
			<td>360294H</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mountant</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6522</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3609</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>CellPath</td>
			<td>RBC-0100-00A</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% Formaldehyde</td>
			<td>Fisher (Acros)</td>
			<td>119690010</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGenix, microwave oven IG2095</td>
			<td>iGenix</td>
			<td>IG2095</td>
			<td>Microwave used for antigen retreival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Industrial methylated spirit (IMS)</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>199050</td>
			<td>99% Industrial Denatured Alcohol (IDA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>InForm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Automated Vacuum Tissue Processor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Arcadia H and C</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Embedding wax bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica RM2125RT</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST4040 Linear Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132-1L</td>
			<td>Staining reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Inserts, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Merck Milipore</td>
			<td>PICMORG50</td>
			<td>Organotypic culture insert disc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novolink Polymer Detection System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RE7150-K</td>
			<td>DAB staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 480</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1500001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 520</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1487001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 570</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 620</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1495001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 650</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1496001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 690</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1497001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPAL 780 / OPAL TSA-DIG Reagent</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>FP1501001KT</td>
			<td>Fluorophore with Dimethyl Sulfoxide (DMSO) diluent and TSA-DIG reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>HRP polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11548876</td>
			<td>For use in tissue culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>PhenoChart</td>
			<td>Viewer software for scanned images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Plus Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36961</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Carrier</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>To load slides into Slide Carrier Hotel for scanning with Vectra Polaris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/63</td>
			<td>10% Formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4920/53</td>
			<td>Reagent for citrate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tenatex Toughened Wax - Pink (500 g)</td>
			<td>KEMDENT</td>
			<td>1-601</td>
			<td>Dental wax surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Shandon Sequenza Slide Rack for Immunostaining Center</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10098889</td>
			<td>Holder for slides and slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11927774</td>
			<td>Slide clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Reagent for TE buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vecta Laboratories</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Polaris Slide Scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Vectra Polaris</td>
			<td>Slide scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Genta Medical</td>
			<td>XYL050</td>
			<td>De-waxing agent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

patient-derived tumor explants as a "live" preclinical platform for predicting drug resistance in patients

A compreensão da resistência a medicamentos e o desenvolvimento de novas estratégias para sensibilizar cânceres altamente resistentes dependem da disponibilidade de modelos pré-clínicos adequados que possam prever com precisão as respostas dos pacientes. Uma das desvantagens dos modelos pré-clínicos existentes é a incapacidade de preservar contextualmente o microambiente tumoral humano (TME) e representar com precisão a heterogeneidade intratumoral, limitando assim a tradução clínica dos dados. Em contraste, representando a cultura de fragmentos vivos de tumores humanos, a plataforma de explante derivada do paciente (PDE) permite que as respostas medicamentosas sejam examinadas em um contexto tridimensional (3D) que espelha as características patológicas e arquitetônicas dos tumores originais o mais de perto possível. Relatórios anteriores com PDEs documentaram a capacidade da plataforma de distinguir quimosensitivos de tumores quimorsistantes, e foi demonstrado que essa segregação é preditiva das respostas dos pacientes às mesmas quimoterapias. Simultaneamente, os PDEs permitem a oportunidade de interrogar características moleculares, genéticas e histológicas de tumores que predizem respostas medicamentosas, identificando assim biomarcadores para estratificação do paciente, bem como novas abordagens intervencionistas para sensibilizar tumores resistentes. Este artigo relata em detalhes a metodologia do PDE, desde a coleta de amostras de pacientes até a análise de ponto final. Fornece uma descrição detalhada dos métodos de derivação e cultura explanta, destacando condições sob medida para tumores específicos, quando apropriado. Para análise de ponto final, há um foco em imunofluorescência multiplexada e imagem multiespectral para o perfil espacial de biomarcadores-chave dentro das regiões tumorais e estrômicas. Ao combinar esses métodos, é possível gerar dados quantitativos e qualitativos de resposta a medicamentos que possam estar relacionados a vários parâmetros clínicopatológicos e, portanto, potencialmente utilizados para identificação de biomarcadores.

A imagem multiespectral de seções histológicas manchadas pelo IFM permite a identificação e fenotipagem de populações celulares individuais e identificação de componentes tumorais e estroma na explanação TME (Figura 2). A imagem multiespectral é particularmente útil para a análise de tecidos com alta autofluorescência intrínseca, como tecido com alto teor de colágeno, pois permite que o sinal de autofluorescência seja desconvoluído de outros sinais e excluído da análise ...

Watch this Scientific Journal Video about Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients at JoVE.com

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

Este artigo descreve métodos para a geração, tratamento medicamentoso e análise de explants derivados do paciente para avaliar as respostas de medicamentos tumorais em um sistema modelo pré-clínico vivo, relevante para o paciente.

Explantas tumorais derivadas do paciente como uma plataforma pré-clínico "viva" para prever a resistência a medicamentos em pacientes

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

As explantas derivadas do paciente são um método de curto prazo que fornece dados imediatos de resposta a medicamentos que podem prever com precisão os resultados dos pacientes. As plataformas PD permitem que as respostas medicamentosas sejam examinadas em um contexto 3D que espelha as características patológicas e arquitetônicas dos tumores regionais o mais próximo possível. Explantas têm o potencial de oferecer novas percepções sobre o metabolismo e mecanismo de ação de uma droga e facilitar a identificação de novos biomarcadores farmacodinâmicos.Antes de iniciar o experimento, limpe todos os equipamentos cirúrgicos com solução de 70% de espíritos metilados industriais. Encha um prato de cultura de 10 centímetros com 25 mililitros de meio fresco no gelo. Usando pinças, transfira a amostra para uma superfície de cera dentária e use duas lâminas de enxerto de pele para cortar o tecido em fragmentos de aproximadamente dois a três milímetros cúbicos.Transfira as explantas em uma antena de 10 centímetros e coloque de seis a nove pedaços do tecido em um tubo de um mililitro contendo uma solução de formalina 10% não tamponada para uma incubação de 24 horas à temperatura ambiente. Encha o número desejado de poços de uma placa de seis poços com 1,5 mililitros de meio fresco por poço. E coloque um prato de inserção de cultura organotípica em cada poço para que ele flutue em cima do meio.Coloque de seis a nove explantes em cada disco de inserção e armazene para uma incubação de 16 horas em uma incubadora de dióxido de carbono de 5% para permitir a recuperação. No dia seguinte, adicione meio fresco e droga a cada poço de uma nova placa. Inclua um poço para o controle do veículo.Quando todos os tratamentos medicamentosos tiverem sido preparados, use pinças para transferir uma inserção para cada poço da nova placa de seis poços para uma incubação de 24 a 48 horas na incubadora de dióxido de carbono. Após o tratamento da droga, transfira os discos para novas seis placas de poço contendo 10% de formalina. E adicione algumas gotas de 10% de formalina ao topo de cada explanta para garantir cobertura completa com o fixador por 24 horas de incubação à temperatura ambiente.No dia seguinte, mergulhe um número apropriado de pequenas esponjas de histologia em 70% solução metilada industrial. E coloque as esponjas dentro de histologia. Quando todas as esponjas tiverem sido colocadas, transfira todas as explantas da mesma condição de tratamento medicamentoso para uma única esponja com o lado tratado da droga de cada explanta entrando em contato com o disco inserido.Coloque outra esponja presoaked em cima de cada explanta e feche o para fixar as explantas no. Em seguida, submergir as fitas em solução metilada 70% industrial antes de prosseguir com o processamento histológico. Após a varredura, realize uma análise de treinamento e carregue as varreduras contendo os selos para treinamento no software de análise adequado.Em uma visão de modo único, navegue pelas imagens e selecione as varreduras para analisar e a varredura com fluorescência intrínseca. com a fluorescência intrínseca em uma única exibição, clique no catador de autofluorescência para desenhar um segmento em uma área de tecido não manchado. Clique em editar marcadores e cores e digite os nomes dos marcadores na caixa associadas a cada fluoróforo.Clique em preparar imagens para permitir que o software subtraia a intensidade da fluorescência intrínseca de todas as imagens enviadas. Clique no passo do tecido do segmento em cima da tela para abrir a janela de treinamento de segmentação de tecidos. No painel categorias teciduais, digite o nome de cada categoria de tecido a ser segmentado.Clique em desenhar, para desenhar regiões em torno de grupos de células na categoria tecidual de interesse. Em seguida, mude para a próxima categoria de tecido e desenhe novas regiões. Quando todas as regiões de treinamento forem definidas, use o segmentador de tecido de trem e aguarde a precisão do treinamento para se estabelecer.Possivelmente para um valor próximo a 100% Clique segmento tudo para segmentar os tecidos. Após verificar a qualidade da segmentação tecidual, clique na segmentação celular e selecione os compartimentos celulares para o segmento. Para configurar o componente nuclear, use o controle deslizante de intensidade típico para ajustar o limiar usado para detectar os pixels nucleares.O feedback ao vivo é fornecido pela janela de visualização. Para dividir os clusters de pixels nucleares, no painel de divisão de componentes nucleares, selecione o botão que melhor descreve a qualidade de coloração dos núcleos e use a barra de controle deslizante para ajustar a sensibilidade de divisão. Em seguida, clique no segmento tudo para segmentar todas as imagens.Quando todas as imagens tiverem sido segmentadas, no painel de fenótipos, adicione a lista de fenótipos a serem detectados e insira o nome dos fenótipos na caixa de texto correspondente. Clique em editar fenótipos para selecionar uma célula específica e selecione o fenótipo correspondente no menu suspenso. Após concluir a seleção para treinamento, clique no classificador de trem para avaliar o resultado de cada fenótipo.Proceda com o fenótipo de todos, salve o projeto e clique em exportar. Selecione a guia de análise em lote e carregue o projeto no algoritmo do lote ou na caixa do projeto. Para exportar as imagens e tabelas, selecione todas as caixas nas opções de exportação, clique em adicionar slides e carregue todas as imagens contendo os selos dos lotes previamente preparados.Em seguida, clique em executar para a análise do lote inicial de um selo e exporte os dados correspondentes quando ele tiver sido adquirido. A imagem multiespectral do tecido explant NSCLC manchado para marcadores de viabilidade celular, permite a identificação e fenotipagem de populações celulares individuais, bem como a identificação de tumores e componentes estrômicos dentro do micro ambiente tumoral explant. A segmentação de tecidos e células do marcador de viabilidade celular mancha imagens multiespectrais como demonstrado, pode ser usada para quantificar a morte celular e a proliferação em explantas derivadas do paciente tratadas com drogas de interesse.Por exemplo, nesta análise, em amostras de tecidos de tumores tratados com Nivolumab, um maior número de células moribundas foram identificadas em comparação com as amostras de tumores tratados de controle. Além disso, como ilustrado, a capacidade de extrair informações espaciais a partir de dissecções manchadas, permite o cálculo das distâncias intercélulas. Explantas também podem ser usadas para perfis espaciais extensos ou citometria em massa, o que permite que centenas de biomarcadores sejam perfilado simultaneamente em resolução subsidiária, preservando a estrutura 3D da amostra.Os PDs poderiam prever a eficácia da imunoterapia. Por exemplo, poderia ser possível distinguir casos sensíveis ou resistentes aos inibidores de checkpoint imunológicos e investigar os mecanismos que sustentam essa distinção.