Integrazione mediata dal sito φC31 e scambio di cassette in Anopheles Vettori della malaria

L'analisi genomica funzionale e le relative strategie per il controllo genetico della malaria si basano su metodi convalidati e riproducibili per modificare con precisione il genoma delle zanzare Anopheles. Tra questi metodi, il sistema φC31 consente l'integrazione precisa e stabile diretta al sito dei transgeni, o la sostituzione di cassette transgeniche integrate tramite scambio di cassette mediato dalla ricombinasi (RMCE). Questo metodo si basa sull'azione della batteriofago integrasi streptomyces φC31 per catalizzare la ricombinazione tra due specifici siti di attacco designati attP (derivato dal fago) e attB (derivato dal batterio ospite). Il sistema utilizza uno o due siti attP che sono stati precedentemente integrati nel genoma della zanzara e nei siti attB nel DNA del modello donatore. Qui illustriamo come modificare stabilmente il genoma delle linee di atnopheles portanti attP usando due plasmidi: un donatore con tag attB che porta il modello di integrazione o scambio e un plasmide helper che codifica l'integrasi φC31. Riportiamo due risultati rappresentativi della modifica diretta dal sito mediata da φC31: la singola integrazione di una cassetta transgenica in An. stephensi e RMCE nelle zanzare An. gambiae. φ La manipolazione del genoma mediata da C31 offre il vantaggio di un'espressione transgenica riproducibile da siti genomici convalidati e neutri per l'idoneità, consentendo analisi comparative qualitative e quantitative dei fenotipi. La natura site-directed dell'integrazione semplifica inoltre sostanzialmente la validazione del singolo sito di inserimento e lo schema di accoppiamento per ottenere una linea transgenica stabile. Queste e altre caratteristiche rendono il sistema φC31 un componente essenziale del toolkit genetico per la manipolazione transgenica delle zanzare della malaria e di altri insetti vettori.