マラリアのアノフェレスベクターにおける部位特異的φC31媒介集積分とカセット交換

マラリアの遺伝的制御のための機能的ゲノム解析および関連する戦略は、アノフェレス蚊のゲノムを正確に改変するための検証済みで再現可能な方法に依存しています。これらの方法の中でも、φC31システムは、導入遺伝子の正確で安定した部位特異的集積、またはリコンビナーゼ媒介カセット交換(RMCE)を介した集積トランスジェニックカセットの置換を可能にする。この方法は、ストレプトマイセスφC31バクテリオファージインテグラーゼの作用に依存して、attP(ファージ由来)およびattB(宿主細菌由来)と命名された2つの特定の付着部位間の組換えを触媒する。このシステムは、以前に蚊ゲノムに組み込まれた1つまたは2つのattPサイトと、ドナーテンプレートDNA中のattBサイトを使用する。ここでは、組み込みまたは交換テンプレートを保持するattBタグ付きドナーとφC31インテグラーゼをコードするヘルパープラスミドの2つのプラスミドを使用して、attP含有アノフェレスドッキングラインのゲノムを安定的に改変する方法を示します。我々は、φC31媒介部位特異的修飾の2つの代表的な結果、すなわち、An. stephensiにおけるトランスジェニックカセットの単一統合と、An. gambiae蚊におけるRMCEの2つの代表的な結果を報告している。φC31媒介ゲノム操作は、検証済みの適応度中立ゲノム部位からの再現性のある導入遺伝子発現の利点を提供し、表現型の比較定性的および定量的分析を可能にする。集積の部位特異的性質はまた、単一の挿入部位および嵌合スキームの検証を実質的に簡素化し、安定したトランスジェニックラインを得る。これらの特性および他の特性により、φC31システムは、マラリア蚊および他の昆虫ベクターのトランスジェニック操作のための遺伝的ツールキットの必須コンポーネントとなっている。