자원 제한 환경에서 실시간 이소레말 핵산 증폭 반응을 모니터링하는 오픈 소스 소형 플루오리미터

핵산을 검출하고 정량화하는 전통적인 방법은 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의존하며 앰플론의 통합형 형광 검출을 통해 고가의 열순환기를 사용해야 합니다. 이더스핵산 증폭 기술은 열순환의 필요성을 제거한다. 그러나, 제품의 형광 기반 검출은 여전히 실시간, 정량적 결과에 필요합니다. 통합형 형광 검출기능이 있는 여러 휴대용 이더스컬 히터가 상용화되었습니다. 그러나 이러한 장치의 비용은 리소스 제한 설정에서 광범위한 채택에 상당한 장벽으로 남아 있습니다. 여기에 설명된 것은 기성 부품으로 구성된 모듈식 저비용 형광계의 설계 및 조립을 위한 프로토콜입니다. 컴팩트한 3D 프린팅 하우징에 동봉된 불소계는 PCR 튜브를 들고 있는 시판되는 열 블록 위에 배치되도록 설계되었습니다. 여기서 설명된 형광계는 형광이소이소(FITC) 염료를 검출하도록 최적화되었지만, 시스템은 실시간 핵산 증폭 반응에서 리포터로서 일반적으로 사용되는 염료와 함께 사용하기 위해 수정될 수 있다. 시스템의 임상 적용성은 두 가지 이더스말 증폭 기술로 실시간 핵산 검출을 수행함으로써 입증된다: 상용 키트및 역전사 루프 매개 이더스말 증폭(RT-LAMP)의 검출을 위한 재조합 폴리머라제 증폭(RPA)은 SARS-CoV-2 RNA의 임상적으로 의미 있는 수준의 검출을 위한 것이다.