使用清晰组织清除方法对全山视网膜进行免疫染色

组织水凝胶脱皮法（CLARITY），最初由戴塞罗斯实验室开发，已被修改并广泛用于免疫染色和成像厚脑样本。然而，这种先进的技术尚未用于全山视网膜。虽然视网膜是部分透明的，但其厚度约为200微米（小鼠），仍然限制抗体渗透到深层组织，并降低高分辨率成像的光渗透。在这里，我们采用了CLARITY方法，用丙烯酰胺单体聚合，形成纳米多孔水凝胶，然后用硫酸钠清除它们，以尽量减少蛋白质损失，避免组织损伤。CLARITY处理的视网膜被视网膜神经元、胶质细胞和突触蛋白的抗体所感染，安装在折射指数匹配溶液中，并成像。我们的数据表明，CLARITY可以提高全安装制备中视网膜神经元和胶质细胞的标准免疫化学染色和成像的质量。例如，CLARITY 大大提高了多巴胺胺类阿米林细胞精细轴突状和树突状结构的 3D 分辨率。与非加工全山视网膜相比，CLARITY 可以揭示突触蛋白（如后突触密度蛋白 95）的免疫染色。我们的结果表明，在去除脂质后，CLARITY 使视网膜更加透明，并保留了视网膜神经元及其蛋白质的精细结构，这些结构可用于在全安装制备中获取视网膜神经元及其子细胞结构的高分辨率成像。