التوصيف الوظيفي للمتغيرات RYR1 البشرية المعبر عنها داخليا

وقد تم تحديد أكثر من 700 المتغيرات في الجين RYR1 في المرضى الذين يعانون من اضطرابات عصبية عضلية مختلفة بما في ذلك فرط الحرارة الخبيثة التعرض, اعتلال عضلي الأساسية واعتلال عضلي سنترونوي. بسبب الأنماط الظاهرية المتنوعة المرتبطة بطفرات RYR1 ، من الأساسي توصيف آثارها الوظيفية لتصنيف المتغيرات التي يحملها المرضى للتدخلات العلاجية المستقبلية وتحديد المتغيرات غير المسببة للأمراض. وقد اهتمت العديد من المختبرات بتطوير طرق لتوصيف وظيفيا طفرات RYR1 المعبر عنها في خلايا المرضى. هذا النهج له العديد من المزايا، بما في ذلك: يتم التعبير عن الطفرات الذاتية، RyR1 لا يتم التعبير عن أكثر من ذلك، يتم تجنب استخدام الخلايا التعبير عن heterologous RyR1. ومع ذلك ، لأن المرضى قد يقدمون طفرات في جينات مختلفة جانبا RYR1 ، فمن المهم مقارنة النتائج من المواد البيولوجية من الأفراد الذين يأوون نفس الطفرة ، مع خلفيات وراثية مختلفة. تصف المخطوطة الحالية الطرق التي تم تطويرها لدراسة الآثار الوظيفية لمتغيرات RYR1 المعبر عنها محليا في: (أ) خلد فيروس إبشتاين بار الخلايا الليمفاوية B البشرية و(ب) الخلايا الساتلية المشتقة من خزعات العضلات والمتمايزة في الميوتوب. ثم يتم رصد التغيرات في تركيز الكالسيوم داخل الخلايا الناجمة عن إضافة المنشطات RyR1 الدوائية. يتم تحميل نوع الخلية المحددة بمؤشر الكالسيوم الفلوري الفلورسنت النسبة ويتم رصد التغيرات داخل الخلايا [Ca²⁺] إما على مستوى الخلية الواحدة عن طريق المجهر الفلوري أو في مجموعات الخلايا باستخدام مقياس الطيف. يستريح [Ca^{2 +}] ، ثم تتم مقارنة منحنيات استجابة الجرعة الناهضة بين الخلايا من الضوابط الصحية والمرضى الذين يؤوون المتغيرات RYR1 مما يؤدي إلى نظرة ثاقبة التأثير الوظيفي للمتغير معين.