TGF-β بوساطة البطانية إلى الانتقال المتوسط (EndMT) والتقييم الوظيفي لمؤثري EndMT باستخدام CRISPR/Cas9 تحرير الجينات

استجابة للإشارات الخارجية المحددة وتنشيط بعض عوامل النسخ ، يمكن للخلايا البطانية التفريق إلى نمط الظاهرية الشبيه بالميزنشيمال ، وهي عملية يطلق عليها الانتقال البطاني إلى المتوسط (EndMT). وقد أشارت النتائج الناشئة إلى أن EndMT مرتبط سببيا بأمراض بشرية متعددة، مثل التليف والسرطان. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تطبيق الخلايا المتوسطة المشتقة من البطانية في إجراءات تجديد الأنسجة، حيث يمكن تمييزها بشكل أكبر إلى أنواع مختلفة من الخلايا (مثل الأروميات العظمية والخلايا الشوندروسيتية). وبالتالي ، فإن التلاعب الانتقائي في EndMT قد يكون له إمكانات سريرية. مثل الانتقال الظهاري-mesenchymal (EMT)، يمكن أن يكون سبب EndMT بقوة من قبل السيتوكين إفراز تحويل عامل النمو بيتا (TGF-β)، الذي يحفز التعبير عن ما يسمى عوامل النسخ EndMT (EndMT-TFs)، بما في ذلك الحلزون والرخوة. هذه EndMT-TFs ثم صعودا وهبوطاتغييد مستويات البروتينات المتوسطة والظهارية، على التوالي. هنا، نقوم بوصف طرق التحقيق في EndMT الناجم عن β TGF في المختبر، بما في ذلك بروتوكول لدراسة دور TFs معينة في EndMT الناجم عن β TGF. باستخدام هذه التقنيات، ونحن نقدم دليلا على أن TGF-α2 يحفز EndMT في خلايا بطانة الأوعية الدموية الدقيقة البنكرياس مورين (خلايا MS-1)، وأن الاستنفاد الوراثي للحلزون باستخدام تتجمع بانتظام يكرر palindromic قصيرة (CRISPR) / CRISPR المرتبطة البروتين 9 (Cas9) بوساطة تحرير الجينات، يلغي هذه الظاهرة. وقد يكون هذا النهج بمثابة نموذج لاستجواب التشكيلات المحتملة لعلم الأحياء البطاني، ويمكن استخدامه لأداء الشاشات الوراثية أو الدوائية من أجل تحديد المنظمين مستجدات EndMT، مع إمكانية تطبيقها في الأمراض البشرية.