Analyse af neutral lipidsyntese i Saccharomyces cerevisiae ved metabolisk mærkning og tyndt lag kromatografi

Neutrale lipider (NLs) er en klasse af hydrofobe, afgiftsfri biomolekyler, der spiller nøgleroller i energi og lipidhomøostase. NLs syntetiseres de novo fra acetyl-CoA og er primært til stede i eukaryoter i form af triglycerider (TGs) og sterol-estere (SE). De enzymer, der er ansvarlige for syntesen af NLs er stærkt bevaret fra Saccharomyces cerevisiae (gær) til mennesker, hvilket gør gær en nyttig model organisme til at dissekere funktion og regulering af NL metabolisme enzymer. Mens meget er kendt om, hvordan acetyl-CoA omdannes til et mangfoldigt sæt af NL arter, mekanismer til regulering af NL metabolisme enzymer, og hvordan mis-regulering kan bidrage til cellulære patologier, er stadig ved at blive opdaget. Talrige metoder til isolering og karakterisering af NL arter er blevet udviklet og anvendt gennem årtiers forskning; der er imidlertid ikke blevet drøftet en kvantitativ og enkel protokol for en omfattende karakterisering af større NL-arter. Her præsenteres en enkel og fleksibel metode til at kvantificere de novosyntesen af større NL-arter i gær. Vi anvender ¹⁴C-eddikesyre metaboliske mærkning kombineret med tyndt lag kromatografi til at adskille og kvantificere en bred vifte af fysiologisk vigtige NLs. Derudover kan denne metode let anvendes til at studere in vivo reaktionshastigheder af NL enzymer eller nedbrydning af NL arter over tid.