Konak-Patojen Etkileşimlerini İncelemek için Aynı Türden Antikorlar Kullanarak Çift Etiketleme İmmünofluoresans

Günümüzde, parazit konak hücre etkileşimlerini incelemek için çok çeşitli moleküler araçlar bulmak mümkündür. Bununla birlikte, parazitlerdeki belirli hücre yapılarını ve proteinleri tanıyan ticari monoklonal veya poliklonal antikorlar elde etmek için bazı sınırlamalar vardır. Ayrıca, tripozosatomatidleri etiketlemek için çok az ticari antikor vardır. Genellikle, parazitlere karşı poliklonal antikorlar şirket içinde hazırlanır ve aynı türde üretilen diğer antikorlarla birlikte kullanılması daha zor olabilir. Burada protokol, konak hücre ve patojen etkileşimlerini incelemek için çift etiketleme immünofluoresansı gerçekleştirmek için aynı türde yetiştirilen poliklonal ve monoklonal antikorların nasıl kullanılacağını göstermektedir. Çift etiketleme immünoflorooresansı elde etmek için, önce fare poliklonal antikorunu kuluçkaya yatırmak ve daha sonra herhangi bir florroma konjuge edilen ikincil fare IgG antikoru ile inkübasyonu takip etmek çok önemlidir. Bundan sonra, birincil antikorun herhangi bir izinin bir sonraki ikincil antikor tarafından tanınmasını önlemek için ek bir engelleme adımı gereklidir. Daha sonra, bir fare monoklonal antikoru ve farklı bir florokroma konjuge edilen spesifik IgG alt sınıfı ikincil antikor uygun zamanlarda numuneye eklenir. Ek olarak, farklı bir türde yetiştirilen üçüncü bir antikor kullanarak üçlü etiketleme immünofluoresans yapmak mümkündür. Ayrıca, çekirdek ve aksin gibi yapılar daha sonra özel bileşikleri veya etiketleri ile lekelenebilir. Böylece, burada sunulan bu yaklaşımlar, birincil antikor kaynakları sınırlı olan herhangi bir hücre için ayarlanabilir.