In vivo Imagerie du calcium chez la souris Olive inférieure

L’olive inférieure (IO), un noyau dans la médulle ventrale, est la seule source de fibres grimpantes qui forment l’une des deux voies d’entrée entrant dans le cervelet. IO a longtemps été proposé pour être crucial pour le contrôle de moteur et son activité est actuellement considérée au centre de nombreuses hypothèses de moteur et de fonctions cognitives du cervelet. Bien que sa physiologie et sa fonction aient été relativement bien étudiées in vitro auniveau unicellulaire, il n’y a actuellement aucun rapport sur l’organisation de l’activité du réseau IO chez les animaux vivants. Ceci est en grande partie dû à l’emplacement anatomique extrêmement difficile de l’IO, le rendant difficile à soumettre aux méthodes fluorescentes conventionnelles d’imagerie, où un chemin optique doit être créé à travers tout le cerveau situé dorsalement à la région d’intérêt.

Nous décrivons ici une méthode alternative pour obtenir des données d’imagerie calcique de pointe à partir du réseau IO. La méthode tire parti de l’emplacement ventral extrême de l’IO et implique une procédure chirurgicale pour insérer une lentille gradient-réfractive index (GRIN) à travers les viscères de cou pour entrer en contact avec la surface ventrale du capteur de calcium GCaMP6s-exprimant IO chez les souris anesthésiées. Un enregistrement représentatif de formation image de calcium est montré pour démontrer la faisabilité d’enregistrer l’activité de neurone IO après la chirurgie. Bien qu’il s’agisse d’une chirurgie de non-survie et que les enregistrements doivent être effectués sous anesthésie, elle évite les dommages aux noyaux critiques pour la vie du tronc cérébral et permet de mener une grande variété d’expériences étudiant les modèles d’activité spatio-temporelle et l’intégration d’entrée dans l’OI. Ce procédé avec des modifications a pu être employé pour des enregistrements dans d’autres, régions adjacentes du tronc cérébral ventral.