In vivo Imágenes de calcio en la aceituna inferior de ratón

La aceituna inferior (IO), un núcleo en la médula ventral, es la única fuente de fibras trepadoras que forman una de las dos vías de entrada que entran en el cerebelo. Io se ha propuesto de largo para ser crucial para el control del motor y su actividad se considera actualmente estar en el centro de muchas hipótesis del motor y de las funciones cognoscitivas del cerebelo. Mientras que su fisiología y función han sido relativamente bien estudiadas a nivel unicelular in vitro, actualmenteno hay informes sobre la organización de la actividad de la red IO en animales vivos. Esto es en gran parte debido a la localización anatómica extremadamente desafiadora del IO, haciéndolo difícil sujetar a los métodos fluorescentes convencionales de la proyección de imagen, donde una trayectoria óptica se debe crear a través del cerebro entero situado dorsal a la región de interés.

Aquí describimos un método alternativo para obtener el estado de la técnica - datos de la proyección de imagen del calcio del nivel de la red io. El método se aprovecha de la ubicación ventral extrema de la IO e implica un procedimiento quirúrgico para insertar una lente de índice de refracción de gradiente (GRIN) a través de las vísceras del cuello para entrar en contacto con la superficie ventral del sensor de calcio GCaMP6s que expresa IO en ratones anestesiados. Una grabación representativa de la proyección de imagen del calcio se demuestra para demostrar la viabilidad de registrar actividad de la neurona io después de la cirugía. Si bien se trata de una cirugía de no supervivencia y las grabaciones deben llevarse a cabo bajo anestesia, evita el daño a los núcleos del tronco encefálico críticos para la vida y permite la realización de una gran variedad de experimentos que investigan los patrones de actividad espaciotemporal y la integración de entrada en el IO. Este procedimiento con modificaciones se podía utilizar para las grabaciones en otras, regiones adyacentes del médula oblonga ventral.