फ्रेट-संवेदनशील उत्सर्जन के साथ लाइव-कोशिकाओं में प्रोटीन इंटरैक्शन का आकलन करना

फॉस्टर रेजोनेंस एनर्जी ट्रांसफर (फ्रेट) एक उत्तेजित दाता से एक स्वीकर्ता अणु में ऊर्जा का विकिरण रहित हस्तांतरण है और अणुओं की दूरी और अभिविन्यास के साथ-साथ दाता उत्सर्जन और स्वीकर्ता अवशोषण स्पेक्ट्रा के बीच ओवरलैप की सीमा पर निर्भर करता है। फ्रेट समय के साथ और विभिन्न उपकोशिकीय डिब्बों में जीवित कोशिका में प्रोटीन की बातचीत का अध्ययन करने की अनुमति देता है। माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके फ्रेट को मापने के लिए विभिन्न तीव्रता-आधारित एल्गोरिदम साहित्य में वर्णित किए गए हैं। यहां, स्वीकर्ता के संवेदनशील उत्सर्जन और दाता अणु के शमन दोनों को मापने के आधार पर फ्रेट दक्षता को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल और एक एल्गोरिदम प्रदान किया जाता है। जीवित कोशिका में अनुपातमित फ्रेट की मात्रा का निर्धारण न केवल फ्लोरोसेंट प्रोटीन के क्रॉसस्टॉक (वर्णक्रमीय स्पिल-ओवर, या ब्लीड-थ्रू) के निर्धारण की आवश्यकता होती है, बल्कि सूक्ष्म सेटअप की पहचान दक्षता भी होती है। यहां दिए गए प्रोटोकॉल में इन महत्वपूर्ण मापदंडों का आकलन करने का विवरण दिया गया है।