Abstract
Biochemistry
סינון מבוסס פרגמנטים (FBS) הוא מושג מאומת ומקובל בתהליך גילוי התרופות הן באקדמיה והן בתעשייה. היתרון הגדול ביותר של סינון מקטעים מבוסס NMR הוא היכולת שלו לא רק לזהות קלסרים מעל 7-8 סדרי גודל של אהדה, אלא גם לפקח על טוהר ואיכות כימית של השברים ובכך לייצר להיטים באיכות גבוהה ומינימום תוצאות חיוביות שגויות או שליליות כוזבות. תנאי מוקדם בתוך FBS הוא לבצע בקרת איכות ראשונית ותקופתית של ספריית המקטעים, קביעת מסיסות ושלמות כימית של המקטעים במאגרים רלוונטיים, והקמת ספריות מרובות כדי לכסות פיגומים מגוונים כדי להתאים למחלקות מטרה מקרומולקולות שונות (חלבונים/RNA/DNA). יתר על כן, נדרשת אופטימיזציה נרחבת של פרוטוקול סינון מבוסס NMR ביחס לכמויות הדגימה, מהירות הרכישה והניתוח ברמת המבנה הביולוגי / מרחב מקטעים, במרחב התנאים (חיץ, תוספים, יונים, pH וטמפרטורה) ובמרחב ליגנד (אנלוגים של ליגנדים, ריכוז ליגנד). לפחות באקדמיה, מאמצי סינון אלה נעשו עד כה באופן ידני באופן מוגבל מאוד, מה שהוביל לזמינות מוגבלת של תשתיות סינון לא רק בתהליך פיתוח התרופות אלא גם בהקשר של פיתוח בדיקות כימיות. על מנת לעמוד בדרישות מבחינה כלכלית, מוצגים תהליכי עבודה מתקדמים. הם מנצלים את החומרה המתקדמת העדכנית ביותר, שבעזרתה ניתן למלא את אוסף הדגימות הנוזליות בצורה מבוקרת טמפרטורה לתוך צינורות NMR באופן אוטומטי. 1ספקטרום מבוסס ליגנד H/19F NMR נאסף לאחר מכן בטמפרטורה נתונה. מחליף דגימות בתפוקה גבוהה (מחליף דגימות HT) יכול לטפל ביותר מ-500 דגימות בבלוקים מבוקרי טמפרטורה. זה יחד עם כלי תוכנה מתקדמים מאיץ את איסוף הנתונים וניתוחם. יתר על כן, יישום של שגרות סינון על דגימות חלבון ורנ"א מתוארים כדי להיות מודעים לפרוטוקולים שנקבעו עבור בסיס משתמשים רחב במחקר ביומקרומולקולרי.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved