げっ歯類とヒト脳組織におけるアクチン重合状態評価のための時間効率の高い蛍光分光法ベースアッセイ

細胞骨格の主要成分であるアクチンは、神経の構造および機能の維持において重要な役割を果たす。生理学的状態では、アクチンは、単量体球状(G-アクチン)および重合糸状(F-アクチン)の2つの形態で平衡状態で生じる。シナプス末端では、アクチン細胞骨格が重要なシナプス前およびシナプス後機能の基礎を形成する。さらに、アクチン重合状態の動的変化(球状と糸状のアクチン間の相互変換)は、シナプス構造および機能における可塑性関連の変化と密接に関連している。我々は、 エクスビボ 条件におけるアクチンの重合状態を評価するための修飾された蛍光ベースの方法論をここに報告する。このアッセイは、アクチンフィラメント(F-アクチン)に特異的に結合するファロトキシンである蛍光標識ファロイジンを採用し、重合糸状アクチンの直接尺度を提供する。原理の証明として、げっ歯類と死後のヒト脳組織ホモジナートの両方にアッセイの適合性の証拠を提供する。ラトランクリンA(アクチンフィラメントを非重合する薬剤)を用いて、F-アクチンレベルの変化をモニタリングする際のアッセイの有用性を確認する。また、我々は、高細胞外^K+での脱分極による刺激時のアクチン重合の増加を確認する単離シナプス末端の生化学的分画にアッセイを拡張する。