Vitrifisering av In Vitro Modned Oocytes Samlet fra voksen og prepubertal eggstokkene i sauer

I husdyr kan in vitro embryoproduksjonssystemer utvikles og opprettholdes takket være det store antallet eggstokker og oocytter som lett kan fås fra et slakteri. Voksne eggstokkene bærer alltid flere antralsekkene, mens i pre-pubertal donorer er maksimalt antall oocytter tilgjengelig ved 4 ukers alder, når eggstokkene bærer topp antall antral follikler. Dermed anses 4 uker gamle lam som gode givere, selv om utviklingskompetansen til prepubertal oocytter er lavere sammenlignet med deres voksne motpart.

Grunnleggende forskning og kommersielle applikasjoner ville bli styrket av muligheten for vellykket kryopreservering vitrified oocytter oppnådd fra både voksne og prepubertal givere. Vitrifiseringen av oocytt samlet fra prepubertal donorer ville også tillate å forkorte generasjonsintervallet og dermed øke den genetiske gevinsten i avlsprogrammer. Imidlertid gjør tapet av utviklingspotensial etter kryopreservering pattedyr oocytter sannsynligvis en av de vanskeligste celletypene å kryopreservere. Blant de tilgjengelige kryopreserveringsteknikkene er vitrifisering mye brukt på dyr og menneskelige oocytter. Til tross for nylige fremskritt i teknikken, induserer eksponeringer for høye konsentrasjoner av kryobeskyttende midler samt kjøleskader og osmotisk stress fortsatt flere strukturelle og molekylære endringer og reduserer utviklingspotensialet til pattedyr oocytter. Her beskriver vi en protokoll for vitrifisering av saueoocytter samlet inn fra unge og voksne givere og modnet in vitro før kryopreservering. Protokollen inkluderer alle prosedyrene fra oocytt in vitro modning til vitrifisering, oppvarming og etteroppvarming inkubasjonsperiode. Oocytter vitrifisert på MII-scenen kan faktisk befruktes etter oppvarming, men de trenger ekstra tid før befruktning for å gjenopprette skade på grunn av kryopreserveringsprosedyrer og for å øke utviklingspotensialet. Dermed er postvarmende kulturforhold og timing avgjørende skritt for restaurering av oocytt utviklingspotensial, spesielt når oocytt samles fra ungdomsdonorer.