Криоструктурированное освещение Микроскопический сбор данных из криогенно сохраненных клеток

Трехмерная (3D) структурированная микроскопия освещения (SIM) позволяет визуализировать флуоресцентно меченые клеточные структуры с более высоким разрешением, чем обычная флуоресцентная микроскопия. Этот метод сверхвысокого разрешения (SR) позволяет визуализировать молекулярные процессы в целых клетках и может использоваться в сочетании с электронной микроскопией и рентгеновской томографией для корреляции структурной и функциональной информации. Sim-микроскоп для криогенно сохраненных образцов (cryoSIM) недавно был введен в эксплуатацию на коррелятивной криовизующей лучевой линии B24 в синхротроне Великобритании.

Он был разработан специально для 3D-визуализации биологических образцов при криогенных температурах способом, совместимым с последующей визуализацией тех же образцов методами рентгеновской микроскопии, такими как криомягмягкая рентгеновская томография. В этой видеостатье представлены подробные методы и протоколы для успешной визуализации с использованием cryoSIM. В дополнение к инструкциям по эксплуатации микроскопа cryoSIM были включены рекомендации относительно выбора образцов, флуорофоров и настроек параметров. Протокол продемонстрирован в образцах клеток U2OS, чьи митохондрии и тубулин были флуоресцентно помечены.