Isolement des hépatocytes primaires de rat avec contrôle de perfusion multiparamétrique

Les hépatocytes primaires sont largement utilisés dans la recherche fondamentale sur les maladies du foie et pour les tests de toxicité in vitro. La procédure de perfusion de collagénase en deux étapes pour l’isolement primaire des hépatocytes est techniquement difficile, en particulier dans la canulation veineuse porte. La procédure est également sujette à une contamination occasionnelle et à des variations des conditions de perfusion en raison de difficultés d’assemblage, d’optimisation ou de maintenance de la configuration de perfusion. Ici, un protocole détaillé pour une procédure améliorée de perfusion de collagénase en deux étapes avec contrôle de perfusion multiparamétrique est présenté. Les hépatocytes primaires de rat ont été isolés avec succès et de manière fiable en prenant les précautions techniques nécessaires aux étapes critiques de la procédure, en réduisant la difficulté opérationnelle et en atténuant la variabilité des paramètres de perfusion grâce à l’adoption d’un cathéter intraveineux spécial, d’un tube jetable stérile normalisé, d’un contrôle de la température et d’un système de surveillance et d’alarme en temps réel. Les hépatocytes primaires isolés chez le rat présentent systématiquement une viabilité cellulaire élevée (85%-95%), un rendement (2-5 x 10⁸ cellules pour 200-300 g de rat) et une fonctionnalité (activité albumine, urée et CYP). La procédure a été complétée par un système de perfusion intégré, suffisamment compact pour être installé dans la hotte à flux laminaire afin d’assurer un fonctionnement aseptique.