다중 파라미터 관류 조절을 통한 원발성 쥐 간세포의 분리

원발성 간세포는 간 질환에 대한 기본 연구 및 시험관 내 독성 테스트에 널리 사용됩니다. 원발성 간세포 분리를 위한 두 단계 콜라게나제 관류 절차는 특히 문맥 정맥 절제술에서 기술적으로 도전적이다. 이 절차는 또한 관류 설정의 조립, 최적화 또는 유지 보수의 어려움으로 인해 때때로 오염되고 관류 조건의 변동이 발생하기 쉽습니다. 여기에서, 다중 파라미터 관류 조절을 통한 개선된 두 단계 콜라게나제 관류 절차를 위한 상세한 프로토콜이 제시된다. 일차 쥐 간세포는 절차의 중요한 단계에서 필요한 기술적 예방 조치를 취하고, 특수 정맥 카테터, 표준화 된 멸균 일회용 튜브, 온도 제어 및 실시간 모니터링 및 경보 시스템의 채택을 통해 운영 어려움을 줄이고 관류 매개 변수의 변동성을 완화함으로써 성공적이고 안정적으로 분리되었습니다. 단리된 일차 래트 간세포는 지속적으로 높은 세포 생존율 (85%-95%), 수율 (래트 200-300 g 당 2-5 x 10⁸ 세포) 및 기능성 (알부민, 우레아 및 CYP 활성)을 나타낸다. 이 절차는 무균 작동을 보장하기 위해 층류 후드에 설치하기에 충분히 컴팩트 한 통합 관류 시스템으로 보완되었습니다.