Aislamiento de hepatocitos primarios de rata con control de perfusión multiparamétrico

Los hepatocitos primarios son ampliamente utilizados en la investigación básica sobre enfermedades hepáticas y para pruebas de toxicidad in vitro. El procedimiento de perfusión de colagenasa de dos pasos para el aislamiento primario de hepatocitos es técnicamente desafiante, especialmente en la canulación de la vena porta. El procedimiento también es propenso a la contaminación ocasional y las variaciones en las condiciones de perfusión debido a dificultades en el montaje, la optimización o el mantenimiento de la configuración de perfusión. Aquí, se presenta un protocolo detallado para un procedimiento mejorado de perfusión de colagenasa de dos pasos con control de perfusión multiparamétrico. Los hepatocitos primarios de rata se aislaron de manera exitosa y confiable tomando las precauciones técnicas necesarias en los pasos críticos del procedimiento, y reduciendo la dificultad operativa y mitigando la variabilidad de los parámetros de perfusión a través de la adopción de un catéter intravenoso especial, tubos desechables estériles estandarizados, control de temperatura y monitoreo y sistema de alarma en tiempo real. Los hepatocitos primarios de rata aislados exhiben consistentemente una alta viabilidad celular (85% -95%), rendimiento (2-5 x 10⁸ células por rata de 200-300 g) y funcionalidad (actividad de albúmina, urea y CYP). El procedimiento se complementó con un sistema de perfusión integrado, que es lo suficientemente compacto como para instalarse en la campana de flujo laminar para garantizar un funcionamiento aséptico.