خط أنابيب إعداد عينة للبلورات الدقيقة في خط شعاع VMXm

تركيب البلورات الدقيقة (<10 ميكرومتر) لبلورة واحدة بلورية بلورية يمثل تحديا غير تافهة. وقد شوهدت تحسينات في جودة البيانات للبلورات الدقيقة مع تطوير البصريات الحزمة، والاستقرار شعاع وحجم شعاع متغير مع التركيز من submicron إلى ميكرون، كما هو الحال في خط الحزم VMXm في مصدر ضوء الماس¹. وسيكتسب المزيد من التحسينات في نوعية البيانات من خلال إدخال تحسينات على بيئة العينة وإعداد العينات. تولد البلورات الدقيقة بطبيعتها حيود أضعف ، وبالتالي فإن تحسين الإشارة إلى الضوضاء هو المفتاح لجمع بيانات حيود الأشعة السينية عالية الجودة وسيأتي في الغالب من انخفاض في ضوضاء الخلفية. المصادر الرئيسية للضوضاء الخلفية بالأشعة السينية في تجربة الحيود هي من تفاعلها مع مسار الهواء قبل وبعد العينة ، محلول التبلور الزائد المحيط بالعينة ، وجود الجليد البلوري والتشتت من أي أجهزة شعاعية أخرى أو نوافذ الأشعة السينية. يتضمن خط الحزم VMXm أجهزة وبروتوكول إعداد عينة لتقليل جميع مصادر الضوضاء هذه.

أولا، تزيل بيئة عينة في الفراغ في VMXm مسار الهواء بين مصدر الأشعة السينية والعينة. بعد ذلك ، تستخدم بروتوكولات إعداد العينة للبلورات الجزيئية الكلية في VMXm عددا من العمليات والأدوات المكيفة من cryoTEM. وتشمل هذه الشبكات النحاسية مع أفلام دعم الكربون هولي، النشاف الآلي والروبوتات التبريد يغرق الاستفادة من الإيثان السائل. تمكن هذه الأدوات من إعداد مئات البلورات الدقيقة على شبكة cryoTEM واحدة مع الحد الأدنى من السائل المحيط على دعم منخفض الضوضاء. كما أنها تقلل من تكوين الجليد البلوري من أي سائل متبقي يحيط بالبلورات.
نقدم عملية إعداد وتقييم جودة البلورات الدقيقة للبروتين القابلة للذوبان باستخدام الضوء المرئي ومسح المجهر الإلكتروني قبل تركيب العينات على خط الحزم VMXm لتجارب حيود الأشعة السينية. كما سنقدم أمثلة على عينات ذات نوعية جيدة وكذلك تلك التي تتطلب المزيد من التحسين والاستراتيجيات للقيام بذلك.