Preparação de filmes de suporte à amostra em microscopia eletrônica de transmissão usando um bloco de flutuação de suporte

A determinação da estrutura pela microscopia crio-elétron (crio-EM) cresceu rapidamente na última década; no entanto, a preparação da amostra continua sendo um gargalo significativo. As amostras macromoleculares são idealmente imagens diretamente de orientações aleatórias em uma fina camada de gelo vítreo. No entanto, muitas amostras são refrattárias a isso, e a desnaturação de proteínas na interface ar-água é um problema comum. Para superar tais questões, apoiar filmes- incluindo carbono amorfo, grafeno e óxido de grafeno - pode ser aplicado à rede para fornecer uma superfície que as amostras podem povoar, reduzindo a probabilidade de partículas experimentando os efeitos deletérios da interface ar-água. A aplicação desses suportes delicados às grades, no entanto, requer um manuseio cuidadoso para evitar quebras, contaminação aérea ou extensas etapas de lavagem e limpeza. Um relatório recente descreve o desenvolvimento de um bloco de flutuação fácil de usar que facilita a transferência molhada de filmes de suporte diretamente para a amostra. O uso do bloco minimiza o número de etapas de manuseio manual necessárias, preservando a integridade física do filme de suporte e o tempo ao longo do qual a contaminação hidrofóbica pode se acumular, garantindo que uma fina película de gelo ainda possa ser gerada. Este artigo fornece protocolos passo a passo para a preparação de suportes de carbono, grafeno e óxido de grafeno para estudos em EM.