유전자 및 단백질 발현 분석을 위해 쥐 견갑골 갈색 지방 조직에서 갈색 지방 세포 분리

갈색 지방 조직 (BAT)은 포유류에서 떨리지 않는 열 발생을 담당하며 갈색 지방 세포 (BA)는 BAT의 기능 단위입니다. BA는 다안 지질 방울과 풍부한 미토콘드리아를 모두 포함하며 결합 해제 단백질 1 (UCP1)을 발현합니다. BA는 기원에 따라 배아 유래 고전 BA(cBA)와 백색 지방 세포 유래 BA의 두 가지 하위 유형으로 분류됩니다. 상대적으로 밀도가 낮기 때문에 BA는 전통적인 원심분리 방법으로 BAT에서 분리할 수 없습니다. 이 연구에서는 유전자 및 단백질 발현 분석을 위해 마우스에서 BA를 분리하는 새로운 방법이 개발되었습니다. 이 프로토콜에서, 성인 마우스로부터의 interscapular BAT를 Collagenase 및 Dispase 용액으로 분해하고, 해리 된 BA를 6 % 요오 딕산 올 용액으로 풍부하게했다. 그런 다음 분리된 BA를 트리졸 시약으로 용해시켜 RNA, DNA 및 단백질을 동시에 분리했습니다. RNA 분리 후, 용해물의 유기상을 단백질 추출에 사용하였다. 우리의 데이터는 6% 요오드 딕산올 용액이 후속 유전자 및 단백질 발현 연구를 방해하지 않으면서 BA를 효율적으로 농축한다는 것을 보여주었습니다. 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF)는 중간 엽 세포의 성장과 증식을 조절하는 성장 인자입니다. 갈색 지방 조직과 비교하여 분리 된 BA는 Pdgfa의 발현이 상당히 높았습니다. 요약하면,이 새로운 방법은 단일 세포 유형 수준에서 갈색 지방 세포의 생물학을 연구하기위한 플랫폼을 제공합니다.