Isolerande bruna adipocyter från murin interscapular brun fettvävnad för gen- och proteinuttrycksanalys

Brun fettvävnad (BAT) är ansvarig för icke-skakande termogenes hos däggdjur, och bruna adipocyter (BA) är de funktionella enheterna i BAT. BA innehåller både multilokulära lipiddroppar och rikliga mitokondrier, och de uttrycker frikopplingsprotein 1 (UCP1). BA kategoriseras i två undertyper baserat på deras ursprung: embryo-härledda klassiska BA (cBA) och vita adipocyter härledda BA. På grund av sin relativt låga densitet kan BA inte isoleras från BAT med traditionell centrifugeringsmetod. I denna studie utvecklades en ny metod för att isolera BA från möss för gen- och proteinuttrycksanalys. I detta protokoll smältes interscapular BAT från vuxna möss med kollagenas och Dispase-lösning, och de dissocierade BA berikades med 6% jodoxanollösning. Isolerade BA lyserades sedan med Trizol-reagens för samtidig isolering av RNA, DNA och protein. Efter RNA-isolering användes den organiska fasen av lysatet för proteinextraktion. Våra data visade att 6% jodoxanollösning effektivt berikade BA utan att störa uppföljande gen- och proteinuttrycksstudier. Trombocyt-härledd tillväxtfaktor (PDGF) är en tillväxtfaktor som reglerar tillväxten och spridningen av mesenkymala celler. Jämfört med den bruna fettvävnaden hade isolerade BA signifikant högre uttryck av Pdgfa. Sammanfattningsvis ger denna nya metod en plattform för att studera biologin hos bruna adipocyter på en enda celltypsnivå.