Abstract
Biochemistry
קריסטלוגרפיה מקרומולקולרית באורך גל ארוך (MX) מנצלת את תכונות הפיזור החריגות של יסודות, כגון גופרית, זרחן, אשלגן, כלור או סידן, שלעתים קרובות נמצאים באופן טבעי במקרומולקולות. זה מאפשר פתרון מבנה ישיר של חלבונים וחומצות גרעין באמצעות פאזה ניסיונית ללא צורך בתיוג נוסף. כדי לחסל את ספיגת האוויר המשמעותית של צילומי רנטגן במשטר אורך גל זה, ניסויים אלה מבוצעים בסביבת ואקום. Beamline I23 במקור אור יהלום, בריטניה, הוא מכשיר סינכרוטרון הראשון מסוגו, תוכנן ואופטימיזציה לניסויי MX בטווח אורך הגל הארוך לכיוון 5 Å.
כדי לאפשר זאת, כלי ואקום גדול מקיף את כל רכיבי תחנת הקצה של סביבת המדגם. הצורך לשמור על דגימות בטמפרטורות קריוגניות במהלך אחסון ואיסוף נתונים בריק דורש שימוש בבעלי מדגם מוליך תרמית. זה מאפשר הסרת חום יעילה כדי להבטיח קירור מדגם כ 50 K. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את ההליכים המשמשים להכנת מדגם והעברת דגימות לוואקום בקו הקרן I23. הבטחת אחידות בפרקטיקות ובשיטות שכבר נקבעו בקהילת הקריסטלוגרפיה המקרומולקולרית, ניתן לבצע קירור מדגם לטמפרטורת החנקן הנוזלי בכל הגדרת מעבדה המצוידת בכלי MX סטנדרטיים.
אחסון קריוגני והובלה של דגימות דורשים רק ציוד זמין מסחרית סטנדרטית. ציוד מיוחד נדרש להעברת גבישים מקוררים קריוגנית מחנקן נוזלי לתחנת הקצה של ואקום. כלי טיפול בדגימות בהתאמה אישית ומערכת העברה קריוגנית ייעודית (CTS) פותחו בבית. נתוני עקיפה שנאספו על דגימות שהוכנו באמצעות פרוטוקול זה מראים סטטיסטיקות מיזוג מצוינות, המציינות כי איכות הדגימות אינה משתנה במהלך ההליך. זה פותח הזדמנויות ייחודיות עבור MX בוואקום בטווח אורך גל מעבר לקורות סינכרוטרון סטנדרטיות.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved