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Biochemistry

डायमंड लाइट स्रोत पर बीमलाइन I23 पर इन-वैक्यूम लंबी तरंग दैर्ध्य क्रिस्टलोग्राफी के लिए नमूना तैयारी और स्थानांतरण प्रोटोकॉल

Published: April 23rd, 2021

DOI:

10.3791/62364

1Diamond Light Source Ltd, Harwell Science & Innovation Campus

Abstract

लंबी तरंग दैर्ध्य मैक्रोमोलेक्यूलर क्रिस्टलोग्राफी (एमएक्स) तत्वों के असंगत प्रकीर्णन गुणों का शोषण करता है, जैसे कि सल्फर, फास्फोरस, पोटेशियम, क्लोरीन, या कैल्शियम, जो अक्सर मैक्रोमोलेक्यूल्स में मूल रूप से मौजूद होते हैं। यह अतिरिक्त लेबलिंग की आवश्यकता के बिना प्रयोगात्मक चरणबद्धता के माध्यम से प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड की प्रत्यक्ष संरचना समाधान को सक्षम बनाता है। इस तरंग दैर्ध्य शासन में एक्स-रे के महत्वपूर्ण वायु अवशोषण को खत्म करने के लिए, ये प्रयोग एक वैक्यूम वातावरण में किए जाते हैं। डायमंड लाइट सोर्स, यूके में बीमलाइन I23, अपनी तरह का पहला सिंक्रोट्रॉन उपकरण है, जिसे 5 Å की ओर लंबी तरंग दैर्ध्य सीमा में MX प्रयोगों के लिए डिज़ाइन और अनुकूलित किया गया है।

इसे संभव बनाने के लिए, एक बड़ा वैक्यूम पोत नमूना वातावरण के सभी एंडस्टेशन घटकों को घेरता है। वैक्यूम में भंडारण और डेटा संग्रह के दौरान क्रायोजेनिक तापमान पर नमूनों को बनाए रखने की आवश्यकता के लिए थर्मल रूप से प्रवाहकीय नमूना धारकों के उपयोग की आवश्यकता होती है। यह लगभग 50 K के लिए नमूना शीतलन सुनिश्चित करने के लिए कुशल गर्मी हटाने की सुविधा प्रदान करता है। वर्तमान प्रोटोकॉल नमूना तैयारी और बीमलाइन I23 पर वैक्यूम में नमूनों के हस्तांतरण के लिए उपयोग की जाने वाली प्रक्रियाओं का वर्णन करता है। मैक्रोमोलेक्यूलर क्रिस्टलोग्राफी समुदाय के भीतर पहले से ही स्थापित प्रथाओं और तरीकों में एकरूपता सुनिश्चित करना, तरल नाइट्रोजन तापमान के लिए नमूना शीतलन मानक एमएक्स उपकरणों से सुसज्जित किसी भी प्रयोगशाला सेटिंग में किया जा सकता है।

क्रायोजेनिक भंडारण और नमूनों के परिवहन के लिए केवल मानक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उपकरणों की आवश्यकता होती है। वैक्यूम एंडस्टेशन में तरल नाइट्रोजन से क्रायोजेनिक रूप से ठंडा क्रिस्टल के हस्तांतरण के लिए विशेष उपकरण की आवश्यकता होती है। बेस्पोक नमूना हैंडलिंग उपकरण और एक समर्पित क्रायोजेनिक ट्रांसफर सिस्टम (सीटीएस) घर में विकसित किया गया है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके तैयार किए गए नमूनों पर एकत्र किए गए विवर्तन डेटा उत्कृष्ट विलय आंकड़े दिखाते हैं, यह दर्शाता है कि प्रक्रिया के दौरान नमूनों की गुणवत्ता अपरिवर्तित है। यह मानक सिंक्रोट्रॉन बीमलाइनों से परे एक तरंग दैर्ध्य सीमा में इन-वैक्यूम एमएक्स के लिए अद्वितीय अवसर खोलता है।

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