Kvantitativ analyse af cellekantdynamik under cellespredning

Cellespredning er en dynamisk proces, hvor en celle, der er ophængt i medier, fastgøres til et substrat og samkopierer sig selv fra en afrundet til en tynd og spredt form. Efter celle-substrat vedhæftet fil, cellen danner et tyndt ark lamellipodia stammer fra cellekroppen. I lamellipodien polymeriseres kugleformede actin (G-actin) monomerer til et tæt filamentous actin (F-actin) meshwork, der skubber mod plasmamembranen, hvilket giver de mekaniske kræfter, der kræves for, at cellen kan sprede sig. Især de molekylære spillere, der styrer actin polymerisering i lamellipodia er afgørende for mange andre cellulære processer, såsom celle migration og endokytose.

Da sprede celler danner kontinuerlig lamellipodi, der spænder over hele cellen periferien og vedvarende udvide udad, celle sprede assays er blevet et effektivt redskab til at vurdere kinetik lamellipodial fremspring. Selv om flere tekniske implementeringer af cellespredningsanalysen er blevet udviklet, mangler der i øjeblikket en detaljeret beskrivelse af arbejdsgangen, som vil omfatte både en trinvis protokol og beregningsværktøjer til dataanalyse. Her beskriver vi de eksperimentelle procedurer i cellespredningsanalysen og præsenterer et open source-værktøj til kvantitativ og upartisk analyse af cellekantdynamik under spredning. Når denne protokol kombineres med farmakologiske manipulationer og/eller genhæmningsteknikker, kan den tilpasses en storstilet skærm af molekylære afspillere, der regulerer lamellipodiale fremspring.