Microscopía crioelectrónica de partícula única: de la muestra a la estructura

La criomicroscopía electrónica (cryoEM) es una técnica poderosa para la determinación de la estructura de complejos macromoleculares, a través del análisis de partículas individuales (SPA). El proceso general consiste en i) vitrificar la muestra en una película delgada apoyada en una rejilla crioEM; ii) examinar la muestra para evaluar la distribución de partículas y la calidad del hielo; iii) si la cuadrícula es adecuada, recopilar un conjunto de datos de una sola partícula para su análisis; y iv) procesamiento de imágenes para obtener un mapa de densidad EM. En este protocolo, se proporciona una descripción general de cada uno de estos pasos, centrándose en las variables que un usuario puede modificar durante el flujo de trabajo y la solución de problemas comunes. Con la operación remota del microscopio convirtiéndose en estándar en muchas instalaciones, se describirán las variaciones en los protocolos de imágenes para ayudar a los usuarios en una operación eficiente y la obtención de imágenes cuando el acceso físico al microscopio es limitado.