Métodos cuantitativos para estudiar la actividad de la arginina metiltransferasa de la proteína 1-9 en células

Las metiltransferasas de la proteína (PRMTs) catalizan la transferencia de un grupo metílico a los residuos de la arginina de las proteínas del substrato. La familia PRMT consiste en nueve miembros que pueden monomethylate o simétricamente/asimétrico dimethylate residuos de arginina. Varios anticuerpos que reconocen diversos tipos de metilación de la arginina de varias proteínas están disponibles; por lo tanto, proporcionando herramientas para el desarrollo de ensayos de biomarcadores de actividad PRMT. Los ensayos basados en anticuerpos PRMT son desafiantes debido a la superposición de sustratos y especificidades de anticuerpos basados en motivos. Estas ediciones y la configuración experimental para investigar la metilación de la arginina aportada por PRMTs individuales se discuten. A través de la cuidadosa selección de los sustratos representativos que son biomarcadores para ocho de cada nueve PRMTs, se diseñó un panel de ensayos de actividad prmt. Aquí, los protocolos para los análisis celulares que miden cuantitativo la actividad enzimática de los miembros individuales de la familia de PRMT en células se divulgan. La ventaja de los métodos descritos es su rendimiento directo en cualquier laboratorio con cultivo celular y capacidades fluorescentes de western blot. La especificidad del sustrato y la fiabilidad de anticuerpos elegida se validaron completamente con enfoques de derribo y sobreexpresión. Además de las directrices detalladas de los biomarcadores y anticuerpos del ensayo, también se proporciona información sobre el uso de una colección de compuestos de herramientas inhibidoras para los PRMTs.