小鼠肝细胞类器官的建立与遗传操作

肝脏是哺乳动物最大的器官。它在葡萄糖储存，蛋白质分泌，代谢和解毒中起重要作用。作为大多数肝功能的执行者，原代肝细胞的增殖能力有限。这就需要建立 离体 肝细胞扩增模型，用于肝脏生理和病理研究。在这里，我们通过两步胶原酶灌注分离小鼠肝细胞，并建立了3D类器官培养物作为"迷你肝脏"，以概括细胞 - 细胞相互作用和物理功能。类器官由异质细胞群组成，包括祖细胞和成熟肝细胞。我们详细介绍了分离和培养小鼠肝细胞或胎儿肝细胞在2-3周内形成类器官的过程，并展示了如何通过机械上下移液来通过它们。此外，我们还将介绍如何将类器官消化成单细胞，用于shRNA/异位构建的慢病毒感染，siRNA转染和CRISPR-Cas9工程。类器官可用于药物筛选，疾病建模和基础肝脏研究，通过模拟肝脏生物学和病理生物学。